dna提取及常見問題分析-資料下載頁
2025-05-10 10:02本頁面
【正文】 ? 當(dāng)沉淀時(shí)間有限時(shí)，用預(yù)冷的乙醇或異丙醇沉淀，沉淀會(huì)更充分 ? 沉淀時(shí)加入 1/10體積的 NaOAc（ ， 3M），有利于充分沉淀 ? 沉淀后應(yīng)用 70％的乙醇洗滌，以除去鹽離子等 ? 晾干 DNA，讓乙醇充分揮發(fā)（不要過分干燥） ? 若長(zhǎng)期儲(chǔ)存建議使用 TE緩沖液溶解 ? TE中的 EDTA能螯和 Mg2+或 Mn2+離子，抑制 DNase ? pH值為 ，可防止 DNA發(fā)生酸解 基因組 DNA的提取 質(zhì)粒 DNA的提取 1. DNA中含有蛋白、多糖、多酚類雜質(zhì) 2. DNA在溶解前，有酒精殘留，酒精抑制后續(xù)酶解反應(yīng) 3. DNA中殘留有金屬離子 原因 對(duì) 策 1. 重新純化 DNA，去除蛋白、多糖、多酚等雜質(zhì)（具體方法見前） 2. 重新沉淀 DNA，讓酒精充分揮發(fā) 3. 增加 70％乙醇洗滌的次數(shù)（ 23次） DNA提取常見問題 ?問題一： DNA樣品不純，抑制后續(xù)酶解和 PCR反應(yīng)。 1. 材料不新鮮或反復(fù)凍融 2. 未很好抑制內(nèi)源核酸酶的活性 3. 提取過程操作過于劇烈， DNA被機(jī)械打斷 4. 外源核酸酶污染 5. 反復(fù)凍融 原因 對(duì) 策 1. 盡量取新鮮材料，低溫保存材料避免反復(fù)凍融 2. 液氮研磨或勻漿組織后，應(yīng)在解凍前加入裂解緩沖液 3. 在提取內(nèi)源核酸酶含量豐富的材料的 DNA時(shí)，可增加裂解液中螯合劑的含量 4. 細(xì)胞裂解后的后續(xù)操作應(yīng)盡量輕柔 5. 所有試劑用無菌水配制，耗材經(jīng)高溫滅菌 6. 將 DNA分裝保存于緩沖液中，避免反復(fù)凍融 DNA提取常見問題 ?問題二： DNA降解。 1. 實(shí)驗(yàn)材料不佳或量少 2. 破壁或裂解不充分 3. 沉淀不完全 4. 洗滌時(shí) DNA丟失 原因 對(duì) 策 1. 盡量選用新鮮（幼嫩）的材料 2. 動(dòng)植物要?jiǎng)驖{研磨充分； G＋菌、酵母裂解前先用生物酶或機(jī)械方式破壁 3. 高溫裂解時(shí)，時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)（對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞、細(xì)菌可增加 PK的用量） 4. 低溫沉淀，延長(zhǎng)沉淀時(shí)間 5. 加輔助物，促進(jìn)沉淀 6. 洗滌時(shí)，最好用槍頭將洗滌液吸出，勿傾倒 DNA提取常見問題 ?問題三： DNA提取量少。 謝謝大家！
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