pcr常見(jiàn)問(wèn)題、原因分析及其對(duì)策-資料下載頁(yè)
2025-07-17 16:30本頁(yè)面
【正文】 案 提高 PCR反應(yīng)特異性的策略 提高 反應(yīng)特異性的策略? 巢式 PCR（ NestPCR） 四種策略 ? 遞減 PCR（ TouchDown PCR） ? 熱啟動(dòng) PCR（ HotStart PCR） ? 使用 PCR增強(qiáng)劑 策略之一 ? 巢式 PCR（ NestPCR） P1 P2 P3 P4 ? 巢式 PCR的使用降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性，因?yàn)橥嗵滓锒蓟パa(bǔ)的靶序列很少。 ? 巢式 PCR可以增加有限量靶序列 （ 如稀有 mRNA） 的靈敏度 ，并且提高了困難 PCR（ 如 539。 RACE） 的特異性 。 策略之二 ? 遞減 PCR（ TouchDown PCR） ? 遞減 PCR通過(guò)在 PCR的前幾個(gè)循環(huán)使用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)耐嘶饤l件提高特異性 。 循環(huán)設(shè)在比估算的 Tm高大約 5℃ 的退火溫度下開(kāi)始 ，然后每個(gè)循環(huán)降低 12℃ ,直到退火溫度低于 Tm 5℃ 。 ? 特異性最高的目的模板會(huì)被優(yōu)先擴(kuò)增 ， 這些產(chǎn)物在隨后的循環(huán)中繼續(xù)擴(kuò)增占據(jù)優(yōu)勢(shì) 。 ? 遞減 PCR對(duì)于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更為有用 ， 如 AFLP、 DNA指紋分析等 。 策略之三 ? 熱啟動(dòng) PCR （ HotStart PCR） ? 熱啟動(dòng)主要是通過(guò)抑制一種基本成分延遲 DNA合成 ，直到 PCR 儀達(dá)到變性溫度； ? 現(xiàn)在有很多公司都有 HotStart Taq酶出售 ， 該酶具有熱啟動(dòng)的性能 ， 使用簡(jiǎn)單方便 ， 適合于高通量應(yīng)用 ； ? 熱啟動(dòng) PCR是除了好的引物設(shè)計(jì)之外 ， 提高 PCR特異性最重要的方法之一 。 策略之四 ? 使用 PCR增強(qiáng)劑 ? 甲酰胺 ， DMSO， 甘油 ， 甜菜堿等都可充當(dāng) PCR的增強(qiáng)劑 。 ? 其可能的機(jī)理是降低熔解溫度 ， 從而有助于引物退火并輔助 DNA聚合酶延伸通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū) 。 ? 增強(qiáng)劑濃度要適當(dāng) 謝謝 ！ 本公司產(chǎn)品江蘇地區(qū)特約代理 南京天為生物科技有限公司 聯(lián)系電話(huà)： 02586073713 84705301 84701501 24小時(shí)服務(wù)熱線： 13057585177 聯(lián)系人：王彤 免費(fèi)技術(shù)支持： 800 810 2177
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