dna提取原理和方法-展示頁
2025-05-22 10:02本頁面
【正文】 added if digestion is not plete after 24 hr。 ? Add ml tail solution and 25 ml Proteinase K, mix well and incubate at 55186。 磁性微粒掛上不同基團可吸附不同的目的物，從而達到分離目的。 低鹽高 pH值結合核酸，高鹽低 pH值洗脫。 DNA提取的幾種方法 ? 基因組 DNA的提取 ? 非基因組 DNA的提取 ? 質粒 DNA的提取 斷裂成為線狀 共價閉合環(huán)狀結構 ? 基因組 DNA的提取 細胞破碎方法 應用 Ⅰ 機械法 1勻漿法 機體軟組織 2搗碎法 動物韌性組織 3研磨法 細菌、酵母 Ⅱ 物理法 1超聲法 細胞混懸液 2反復凍融法 培養(yǎng)細胞 3冷熱交替法 細菌、病毒 4低滲裂解 紅細胞 Ⅲ 化學法 1有機溶劑 細菌、酵母 2去垢劑 組織、培養(yǎng)細胞 3酶解法 細菌、酵母 根據裂解方式的不同有： ? 吸附材料結合法： 根據核酸分離純化方式的不同有： ? 硅質材料 ? 陰離子交換樹脂 ? 磁珠 高鹽低 pH值結合核酸，低鹽高 pH值洗脫。 ? 天然狀態(tài)的 DNA 是以脫氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在于細胞核中。 DNA extraction ? 極性化合物，溶于水，不溶于 乙醇、氯仿 等有機溶劑，鈉鹽比游離核酸易溶于水。前者為 雙鏈線性分子 ；后者為 雙鏈環(huán)狀分子 。 DNA extraction ZJL ? 細胞內的核酸包括 DNA與 RNA兩種分子，均與蛋白質結合成核蛋白。 ? 真核生物的 DNA又有染色體 DNA與細胞器 DNA之分。 ? 除此之外，在原核生物中還有雙鏈環(huán)狀的質粒 DNA；在非細胞型病毒顆粒內， DNA的存在形式多種多樣。 ? 在酸性溶液中， DNA、 RNA易水解，在 中性或弱堿性 溶液中較穩(wěn)定。 核酸的理化性質 提取 DNA總的原則 : 1 保證核酸一級結構的完整性； 2 其他生物大分子的污染應降低到最低程度； 3 核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子； 4 其他核酸分子，如 RNA， 也應盡量去除。 快捷高效。 適用于純度要求高的實驗。 ? 基因組 DNA的提取 ? 濃鹽法 ： ? 有機溶劑抽提法： ? 密度梯度離心法： 利用 RNP和 DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離 有機溶劑作為蛋白變性劑，同時抑制核酸酶的降解作用 利用不同內容物密度不同的原理分離各種內容物 ? 基因組 DNA的提取 ? SDS法流程圖 （以動物組織為例） 動物組織 細胞裂解 上層溶液 組織勻漿 抽提 干燥溶解 離心洗滌 酒精沉淀 DNA溶液 基因組 DNA－
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