質(zhì)粒dna的提取及檢測(cè)-資料下載頁(yè)
2025-05-15 00:19本頁(yè)面
【正文】 點(diǎn)：染色操作簡(jiǎn)便 ， 快速 ， 室溫下 1520min；不會(huì)使核酸斷裂；靈敏度高 ， 10ng或更少的 DNA即可檢出；可以加到樣品中可膠中 。 ? EB是誘變劑 ， 使用時(shí)一定要戴手套 。 EB廢液要經(jīng)過(guò)處理才能丟棄 。 ? SYBR:新型低毒 ， 高靈敏度染料 ， 加入樣 品中 ， 價(jià)格較昂貴 。 ? Gene finder:新型低毒 ， 高靈敏度染料 ， 加入樣膠中 ，價(jià)格較低 。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) DNA的方法和技術(shù)。 二、實(shí)驗(yàn)原理 ? DNA在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。 ? 核酸為兩性分子，在 ，整個(gè)分子帶正電； PH8左右時(shí)，堿基幾乎不解離，整個(gè)分子帶負(fù)電。 ? 在堿性環(huán)境下，相同堿基數(shù)量的雙鏈 DNA幾乎具有等量的凈負(fù)電荷，能以同樣的速度向正極方向移動(dòng)。具有不同的相對(duì)分子質(zhì)量的 DNA片段泳動(dòng)速度不一樣，可進(jìn)行分離。 DNA分子的遷移速度與相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系，可以近似用于估算分子的大小。 ? 可以分離相對(duì)分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的 DNA分子。 共價(jià)閉環(huán)超螺旋 DNA（ cccDNA）＞ 直線 DNA（ LDNA， 2條鏈發(fā)生斷裂）＞開(kāi)環(huán)的雙鏈環(huán)狀 DNA（ ocDNA， 1條鏈發(fā)生斷裂）。 三、 儀器、材料與試劑 ?（一） 儀器 ?（二）材料 DNA （三）試劑 1． 5 TBE儲(chǔ)液 () 使用時(shí)稀釋 10倍成 TBE （ 1 TBE也可）。 2．凝膠加樣緩沖液 %溴酚藍(lán)， 50%蔗糖 3. 瓊脂糖 （ EB）， 4℃ 保存。用時(shí)稀釋成5ug/ml的 EB。 四、實(shí)驗(yàn)操作步驟 ? 瓊脂糖凝膠的制備（配制濃度依照所提質(zhì)粒的大小來(lái)確定） . ? 凝膠板的制備 ? 加樣（加樣體積在 10~30ul） ? 電泳 ? 染色 ? 結(jié)果觀察 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 ? 根據(jù)觀察結(jié)果，繪圖。 ? 分析自提質(zhì)粒的情況。
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