菜花、肝臟dna的提取及瓊脂糖凝膠檢測(cè)-資料下載頁
2024-09-28 11:05本頁面
【導(dǎo)讀】學(xué)習(xí)DNA提取的原理及方法。掌握瓊脂糖凝膠電泳的操作方法。運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA。1）應(yīng)保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性。2）排除其他分子的污染。A．核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)其有抑制作用的有機(jī)溶。劑和過高濃度的金屬離子。B．其他生物大分子如：蛋白質(zhì)，多糖和脂類分子。的污染應(yīng)降低到最低程度。勻漿器，搗碎器，溶菌酶消化，堿裂解等。取，提RNA要在偏酸的環(huán)境中穩(wěn)定。度的NaCl溶液將DNA和RNA從樣品中分開。同時(shí)可除去脂類。減少物理因素對(duì)DNA的降解。動(dòng)作輕柔緩慢，盡可能。開時(shí)60－70℃水浴外，其余操作盡可能在冰浴上進(jìn)行。用剪刀剪去一段，防止槍頭對(duì)DNA造成機(jī)械損傷。1，稱取肝臟或者菜花5g,用水清洗后，加入石英砂(半匙)研。2，上述沉淀物加入EDTA溶液６ml，再。3，上述溶液倒入研缽中，加入５ＭNaCl溶液３ml，攪拌10. 5，加100ul-200ul水溶解DNA。束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。所用試劑的目的。
【正文】 濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應(yīng)用比較廣泛。核酸分離一般用連續(xù)緩沖體系，常用的有 TBE（ HCl， ， 硼酸， ） 用上述緩沖液配制 1%瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至 55℃ 時(shí)加入溴化乙錠（ EB）至終濃度為 ，然后將其注入玻璃板或有機(jī)玻璃板組裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時(shí)，梳齒下端距玻璃板 ，待膠凝固后，取出梳子，加入適量電極緩沖液使板膠浸沒在緩沖液下 1mm處。 5ul的樣品中加入 5ul上樣緩沖液：含指示染料（ ％溴酚藍(lán)或桔黃橙）、蔗糖（ 10％ 15％）或甘油（ 5％ 10％），也可使用 ％ Fico Ⅱ 增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣 10ul(510ug) 5. 電泳 一般電壓為 515V/cm ,根據(jù)指示劑泳動(dòng)的位置，判斷是否終止電泳 (本次實(shí)驗(yàn)用 100V， 70mA， 20－ 40min) 提取完好的 DNA瓊脂糖凝膠電泳圖譜 未除去 RNA的 DNA瓊脂糖凝膠電泳圖譜 五 .實(shí)驗(yàn)結(jié)果 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析討論 七、 思考題 1，寫出本次實(shí)驗(yàn)中提取 DNA時(shí)每一步操作中所用試劑的目的。 2，查閱相關(guān)資料，寫出至少一種其它方法提取 DNA的原理及步驟
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