第五講-dna的提取原理及提取技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-08-15 20:30本頁(yè)面
【正文】 狀 DNA發(fā)生變性，質(zhì)粒 DNA維持環(huán)狀。 在高鹽條件下作復(fù)性處理，變性的染色體 DNA會(huì)形成沉淀，從而將質(zhì)粒 DNA與染色體 DNA分開。質(zhì)粒質(zhì)粒 DNA的提?。瓑A裂解法的提取－堿裂解法l 染色體 DNA比質(zhì)粒 DNA分子大得多，且染色體 DNA為線狀分子，而質(zhì)粒 DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；l 當(dāng)用堿處理 DNA溶液時(shí)，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒 DNA在回到中性 pH時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象；l 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過(guò)離心將兩者分開。l 溶液 I （ 50mmol/L葡萄糖， 10mmol/L EDTA， 25mMTrisHCl ） 作用：分散細(xì)胞 167。 溶液 II (, 1%SDS) (SDS,十二烷基硫酸鈉） 作用：細(xì)胞壁肽聚糖堿性下水解，核酸和蛋白質(zhì)變性。167。 溶液 III （ 3mol/L KAc,） 作用：酸性下質(zhì)粒 DNA復(fù)性，變性蛋白、線性DNA沉淀。提取大腸桿菌質(zhì)粒 DNA的步驟1 取制備好的菌液 的菌體懸浮于 100ul預(yù)冷的溶液 Ⅰ 中，震蕩使細(xì)胞分散。2 在冰水浴中 5min后，加入 200ul溶液 Ⅱ ，快速顛倒幾次，使充分混勻。此時(shí)，混合液的 PH值在 ，使細(xì)胞壁破裂， DNA變性。3 DNA的分離抽提。 將離心管置于冰水浴中 5min后，加入150mL預(yù)冷的溶液 Ⅲ ，顛倒離心管和震蕩 10s，使其混勻。 置于冰水浴中 5min。此時(shí)的 PH值在 ,使質(zhì)粒 DNA選擇性復(fù)性，而染色體 DNA隨 SDS和蛋白質(zhì)一起沉淀下來(lái)。4 4 ℃ ， 12022rpm離心 5min，吸取上清液移到另一個(gè)離心管。5 去蛋白質(zhì)，加氯仿 /異戊醇6 重復(fù) 47 向上清液中加入 2體積的無(wú)水乙醇， 20℃ 下放置 30min，沉淀 DNA。8 4 ℃ ， 12022rpm離心 5min，棄上清液9 在超凈工作臺(tái)吹干10 加入 50ulTE， 20℃ 保存?zhèn)溆谩? 液氮罐 制冰機(jī)高速冷凍離心機(jī)思考題：1 植物基因組 DNA提取原理與基本步驟2 大腸桿菌質(zhì)粒 DNA提取原理與基本步驟
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