第五講-dna的提取原理及提取技術-資料下載頁
2025-08-15 20:30本頁面
【正文】 狀 DNA發(fā)生變性，質粒 DNA維持環(huán)狀。 在高鹽條件下作復性處理，變性的染色體 DNA會形成沉淀，從而將質粒 DNA與染色體 DNA分開。質粒質粒 DNA的提?。瓑A裂解法的提?。瓑A裂解法l 染色體 DNA比質粒 DNA分子大得多，且染色體 DNA為線狀分子，而質粒 DNA為共價閉合環(huán)狀分子；l 當用堿處理 DNA溶液時，線狀染色體 DNA容易發(fā)生變性，共價閉環(huán)的質粒 DNA在回到中性 pH時即恢復其天然構象；l 變性染色體 DNA片段與變性蛋白質和細胞碎片結合形成沉淀，而復性的超螺旋質粒 DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過離心將兩者分開。l 溶液 I （ 50mmol/L葡萄糖， 10mmol/L EDTA， 25mMTrisHCl ） 作用：分散細胞 167。 溶液 II (, 1%SDS) (SDS,十二烷基硫酸鈉） 作用：細胞壁肽聚糖堿性下水解，核酸和蛋白質變性。167。 溶液 III （ 3mol/L KAc,） 作用：酸性下質粒 DNA復性，變性蛋白、線性DNA沉淀。提取大腸桿菌質粒 DNA的步驟1 取制備好的菌液 的菌體懸浮于 100ul預冷的溶液 Ⅰ 中，震蕩使細胞分散。2 在冰水浴中 5min后，加入 200ul溶液 Ⅱ ，快速顛倒幾次，使充分混勻。此時，混合液的 PH值在 ，使細胞壁破裂， DNA變性。3 DNA的分離抽提。 將離心管置于冰水浴中 5min后，加入150mL預冷的溶液 Ⅲ ，顛倒離心管和震蕩 10s，使其混勻。 置于冰水浴中 5min。此時的 PH值在 ,使質粒 DNA選擇性復性，而染色體 DNA隨 SDS和蛋白質一起沉淀下來。4 4 ℃ ， 12022rpm離心 5min，吸取上清液移到另一個離心管。5 去蛋白質，加氯仿 /異戊醇6 重復 47 向上清液中加入 2體積的無水乙醇， 20℃ 下放置 30min，沉淀 DNA。8 4 ℃ ， 12022rpm離心 5min，棄上清液9 在超凈工作臺吹干10 加入 50ulTE， 20℃ 保存?zhèn)溆谩? 液氮罐 制冰機高速冷凍離心機思考題：1 植物基因組 DNA提取原理與基本步驟2 大腸桿菌質粒 DNA提取原理與基本步驟
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