核酸提取經驗及原理總結-資料下載頁
2024-11-25 22:14本頁面
【正文】 間的一個平面基團，這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近，導致染料與 DNA結合并呈現(xiàn)熒光，其熒光產率比游離染料溶液有所增加。 核酸中雜質的去除 ? 肝糖元、淀粉及粘多糖 ? 蛋白質的除去 ? 不同類型核酸的分離 ? 同類核酸的分離 核酸中除雜質 肝糖元、淀粉及粘多糖 ? ① 取材前盡量減少組織中多糖的含量，如先使動物饑餓數(shù)天然后殺死，可使細胞內肝糖元大大減少。②加入淀粉酶，將大分子多糖分解為小分子，在以后純化步驟中逐漸被除去。③在濃磷酸鹽存在下，以 2甲氧基乙醇抽提核酸提取液，使多糖溶于下層水相，核酸在上面有機層中。④以鈣鹽沉淀 DNA，再以草酸鉀處理，使之形成 DNA鉀鹽回收，然后用離子交換法吸附 DNA，使之與多糖分離。 核酸中除雜質 蛋白質的除去 ? ① 加入去污劑如硫酸十二脂鈉，從提取到分離純化各階段均可反復使用此法。去污劑與氯仿法或苯酚法結合使用，效果更加理想。②氯仿 戊醇或辛醇對提取液搖蕩抽提，蛋白質在氯仿 水界面形成凝膠，離心后除去，核酸留在水溶液中。此法在分離純化中也常反復使用。③苯酚水溶液抽提，在對氨基水楊酸等陰離子化合物存在下， DNA或 RNA都可以進入水相，蛋白質則沉淀于酚層，然后取水相加入乙醇或 2乙氧基乙醇沉淀 RNA或 DNA，殘余的酚可用葡聚糖凝膠 G10或 G25除去。 核酸中除雜質 不同類型核酸的分離 ? 在 RNA制品中除去 DNA，苯酚水溶液抽提是較有效和常用的方法 。 ? 在 DNA中加核糖核酸酸酶選擇地破壞RNA，是除 RNA比較有效的方法 。 核酸中除雜質 同類核酸的分離 ? DNA混合物的分離：主要是變性或降解的 DNA和天然的分離。 ? RNA混合物的分離經過提取的初步純化的 RNA制品中含有各類 RNA和某些已降解的 RNA混雜物。進一步純化時，多應用柱層析、梯度離心及逆流分溶等方法。 螺旋網管理團隊感謝你參與！
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