核酸提取經(jīng)驗(yàn)及原理總結(jié)-資料下載頁(yè)
2025-07-25 10:31本頁(yè)面
【正文】 的一個(gè)平面基團(tuán)，這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的密切接近，導(dǎo)致染料與 DNA結(jié)合并呈現(xiàn)熒光，其熒光產(chǎn)率比游離染料溶液有所增加。 核酸中雜質(zhì)的去除 ? 肝糖元、淀粉及粘多糖 ? 蛋白質(zhì)的除去 ? 不同類(lèi)型核酸的分離 ? 同類(lèi)核酸的分離 核酸中除雜質(zhì) 肝糖元、淀粉及粘多糖 ? ① 取材前盡量減少組織中多糖的含量，如先使動(dòng)物饑餓數(shù)天然后殺死，可使細(xì)胞內(nèi)肝糖元大大減少。②加入淀粉酶，將大分子多糖分解為小分子，在以后純化步驟中逐漸被除去。③在濃磷酸鹽存在下，以 2甲氧基乙醇抽提核酸提取液，使多糖溶于下層水相，核酸在上面有機(jī)層中。④以鈣鹽沉淀 DNA，再以草酸鉀處理，使之形成 DNA鉀鹽回收，然后用離子交換法吸附 DNA，使之與多糖分離。 核酸中除雜質(zhì) 蛋白質(zhì)的除去 ? ① 加入去污劑如硫酸十二脂鈉，從提取到分離純化各階段均可反復(fù)使用此法。去污劑與氯仿法或苯酚法結(jié)合使用，效果更加理想。②氯仿 戊醇或辛醇對(duì)提取液搖蕩抽提，蛋白質(zhì)在氯仿 水界面形成凝膠，離心后除去，核酸留在水溶液中。此法在分離純化中也常反復(fù)使用。③苯酚水溶液抽提，在對(duì)氨基水楊酸等陰離子化合物存在下， DNA或 RNA都可以進(jìn)入水相，蛋白質(zhì)則沉淀于酚層，然后取水相加入乙醇或 2乙氧基乙醇沉淀 RNA或 DNA，殘余的酚可用葡聚糖凝膠 G10或 G25除去。 核酸中除雜質(zhì) 不同類(lèi)型核酸的分離 ? 在 RNA制品中除去 DNA，苯酚水溶液抽提是較有效和常用的方法 。 ? 在 DNA中加核糖核酸酸酶選擇地破壞 RNA，是除 RNA比較有效的方法 。 核酸中除雜質(zhì) 同類(lèi)核酸的分離 ? DNA混合物的分離：主要是變性或降解的 DNA和天然的分離。 ? RNA混合物的分離經(jīng)過(guò)提取的初步純化的 RNA制品中含有各類(lèi) RNA和某些已降解的 RNA混雜物。進(jìn)一步純化時(shí)，多應(yīng)用柱層析、梯度離心及逆流分溶等方法。 螺旋網(wǎng)管理團(tuán)隊(duì)感謝你參與！
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