實(shí)驗(yàn)一質(zhì)粒dna的提取和鑒定-資料下載頁(yè)
2025-05-11 07:23本頁(yè)面
【正文】 E 6?r? 五、影響電泳速度的因素 （ E） E↑→ 電流 ↑→ 熱效應(yīng) → 支持介質(zhì)上的水分蒸發(fā) → 樣品的熱變性 E↓→ 電泳速度慢 → 延長(zhǎng)電泳時(shí)間 → 樣品擴(kuò)散 → 區(qū)帶模糊不清 → 分辨率下降 2. 帶點(diǎn)顆粒的半徑 r ↑→ 阻力 ↑→ 電泳速度變慢 3. 支持物介質(zhì) —— 吸附作用；電滲作用；分子篩作用 4 緩沖液 離子強(qiáng)度 （ I） ： I↑→ 緩沖能力越大 → 緩沖液所載的分電流增加 ， 而樣品所載的電流相應(yīng)減少 → 電泳速度減慢 pH： pH值決定了化合物解離的程度 ， 也決定了質(zhì)點(diǎn)所帶的凈電荷 。 電泳 ? 在一定電場(chǎng)強(qiáng)度下， DNA分子的遷移取決于分子篩效應(yīng)，即 DNA分子本身的 大小 和 構(gòu)型 (相對(duì)分子質(zhì)量不同的 DNA片段泳動(dòng)速度不一樣 )，且 DNA分子的遷移速度與相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系。 ? 凝膠電泳 不僅可分離 不同相對(duì)分子質(zhì)量 的 DNA，也可以 分離相對(duì)分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的DNA分子。 瓊脂糖凝膠 ? 從瓊脂中除去帶電荷的瓊脂膠后，剩下的不含磺酸基團(tuán)、羧酸基團(tuán)等帶電荷基團(tuán)的中性部分，結(jié)構(gòu)是鏈狀的聚半乳糖，易溶于沸水，冷卻后可依靠糖基間的氫鍵引力形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 ? 凝膠的網(wǎng)孔大小和凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于瓊脂糖濃度。因此瓊脂糖凝膠可作為 分子篩 ，常用于 凝膠層析和電泳 。 電泳鑒定 ? 其中 超螺旋結(jié)構(gòu) 泳動(dòng)最快； ? 其次為 線性結(jié)構(gòu)； ? 最慢的可能是 復(fù)制中間體 （沒有復(fù)制完的兩個(gè)質(zhì)粒連在一起）； 染料 —— EB ? 溴化乙錠（ EB）是一種熒光染料 (3,8二氨基 5乙基 6苯基菲啶溴鹽 )，其分子可以嵌入到核酸的堿基對(duì)之間，在紫外線的激發(fā)下，發(fā)出橙色熒光。 注意 ? EB是誘變劑，配制和使用 EB染色液時(shí)，應(yīng)帶乳膠手套或一次性手套，并且不要將該染色液灑在桌面或地面上，凡是沾污 EB的器皿或物品，必須進(jìn)行清洗或棄去。
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