實(shí)驗(yàn)一堿變性法抽提質(zhì)粒dna-資料下載頁(yè)
2025-05-15 01:43本頁(yè)面
【正文】 ? 漂洗沉淀時(shí)不要將沉淀沖掉 溶液 Ⅰ 50mmol/L 葡萄糖 。 25mmol/L TrisCl()。 10mmol/L EDTA(pH ) (主要作用 ： Solution I 中的 EDTA可以螯合二價(jià)金屬離子進(jìn)而抑制依賴于二價(jià)金屬離子的 DNA酶的活性 ， 對(duì) DNA起到保護(hù)作用 。 加入 solutionⅠ 后一定要充分打散菌體 。 ) 溶液 Ⅱ (pH ) 。1%SDS (現(xiàn)用現(xiàn)配 ) (主要 作用：細(xì)胞壁肽聚糖堿性下水解 ， 核酸和蛋白質(zhì)變性 . Solution II要新鮮配置 ,NaOH可吸收空氣中的二氧化碳而減弱堿性 。 加入solution II后放置時(shí)間不要超過(guò) 5min， 以免變性質(zhì)粒不易復(fù)性 ) 溶液 Ⅲ (pH ) 100ml 5mol/L NaAc 60ml。 冰醋酸 。 雙蒸水 (作用：中和堿液，質(zhì)粒DNA復(fù)性，變性蛋白－ SDS＋ , 線性 DNA沉淀 ) ? 氯仿 /異戊醇（ 24： 1） ： 氯仿可使蛋白質(zhì)變性，異戊醇有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的泡沫 。 ? 無(wú)水乙醇 ：除去 DNA水化層，使 DNA沉淀 ? TE（ ） : 10mmol/L TrisCl()。 1mmol/L EDTA(pH ) (溶解 DNA) 離心 amp。沉淀 漩渦混合器 云霧狀沉淀
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