實驗五質(zhì)粒提取ppt課件-資料下載頁
2025-04-29 00:10本頁面
【正文】 2ml LB Amp+液體培養(yǎng)基中?370C， 190rpm振蕩培養(yǎng)過夜（ OD=）?用 ， 12022rpm、離心 1min， 棄上清 ,將管倒置于紙上 ,使液體流盡?加 100uL預冷的溶液 I懸浮菌體 （需劇烈振蕩）?加入 200uL溶液 II（現(xiàn)配現(xiàn)用），溫和顛倒 eppendorf 管數(shù)次 ,以混勻內(nèi)容物 （溶液變清澈透明）?加入 150uL預冷的溶液 III， 溫和顛倒 eppendorf 管數(shù)次 ,使沉淀混勻 ， 冰上靜置 5min質(zhì)粒 DNA復性 （ 明顯的白色沉淀）?加一滴氯仿， 12022rpm， 4℃ 離心 5min?取上清液移入干凈 eppendorf 管中 ,加 250ul NH4Ac，混勻， 12022rpm， 4℃ 離心 5min?取上清液移入干凈 eppendorf 管中 ,加 1ml 無水乙醇混勻， 20度 20min沉淀 DNA?12022rpm， 4℃ 離心 10min?小心棄去上清，將管口敞開倒置于紙上使所有液體流出 ,加入 1ml 70％乙醇洗沉淀一次，沉淀超凈臺中風干?將沉淀溶于 20μl TE 緩沖液 (，含 20μg /ml RNaseA) 中，儲于 20℃ 冰箱中[注意 ] 1. 提取過程應盡量保持低溫。2. 提取質(zhì)粒 DNA 過程中除去蛋白很重要 ,采用酚 /氯仿去除蛋白效果較單獨用酚或氯仿好 ,要將蛋白盡量除干凈需多次抽提。3. 沉淀 DNA 通常使用冰乙醇 ,在低溫條件下放置時間稍長可使DNA 沉淀完全。沉淀 DNA 也可用異丙醇 (一般使用 積 ),且沉淀完全 ,速度快 ,但常把鹽沉淀下來 ,所以多數(shù)還是用乙醇。質(zhì)粒 DNA的電泳鑒定%瓊脂糖凝膠 (用 TAE buffer配 )1xTAE 1uL質(zhì)粒 DNA + 1uL 10xloading 5伏 /cm恒壓電泳， 45min結(jié)果用凝膠成像儀分析照相
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