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質(zhì)粒的酶切ppt課件-資料下載頁

2025-05-26 00:15本頁面
  

【正文】 ,載體脫磷 ,提高酶量 不匹配粘端連接圖示 匹配粘端連接圖示 平端連接圖示 DNA片段的連接反應(yīng) 連接反應(yīng)一般在滅菌的 1. 10μl 體積反應(yīng)體系中:取載體 50100ng, 加入一 定比例的外源 DNA 分子 ( 一般線性載體 DNA分子與外源 DNA分子摩爾數(shù)為 1∶ 11∶ 5) , 補(bǔ) ddH2O 至 8μl 。 2. 輕輕混勻 , 稍加離心 , 置 56℃ 5min, 迅速轉(zhuǎn)入冰浴 。 4. 加入含 ATP的 10 Buffer 1μl 。 5. T4 DNA連接酶 1μl 。 6. 稍加離心 ,1416℃ 連接 814hr。 TA連接 NGF NGF PCR產(chǎn)物 A A T T pGEMT pGEMNGF 連接 連接產(chǎn)物的藍(lán)白斑鑒定
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