人類細(xì)胞質(zhì)rna提取rtpcr的原理方法瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用分析-資料下載頁(yè)
2024-10-03 10:43本頁(yè)面
【正文】 NaCl緩沖液稀 釋 DNA。 DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適。 在脈沖凝膠電泳上個(gè)分析。 第四十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。 2024/9/25 結(jié)果分析 〔二〕、常見問題的原因和解決 常見問題 原因 對(duì)策 帶弱或無DNA帶 DNA上樣量不夠 增加 DNA上樣量，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度高，上樣量可適當(dāng)降低。 DNA降解 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)避免核酸酶污染。 DNA跑出凝膠 縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增加凝膠濃度。 EB染色的 DNA所用光源不合適 應(yīng)用短波長(zhǎng)（ 254nm）的紫外光源。 第四十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。 2024/9/25 結(jié)果分析 〔二〕、常見問題的原因和解決 常見問題 原因 對(duì)策 出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶 酶量多或者酶的質(zhì)量差，dNTP濃度高， Mg2+濃度高，退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)多。 減少酶量或更換酶，減少 dNTP濃度，適當(dāng)降低 Mg2+濃度，增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。 不規(guī)則 DNA帶遷移 電泳條件不合適 電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過 20V/cm，溫度 30℃ ，巨大 DNA鏈電泳， 溫度 15℃ ，檢查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換。 DNA變性 電泳前勿加熱，用 20mM NaCl緩沖液稀釋 DNA。 第四十三頁(yè)，共四十九頁(yè)。 常見問題 原因 對(duì)策 DNA條帶模糊 DNA降解 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)避免核酸酶污染。 電泳緩沖液陳舊 電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低， PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。TBE建議使用 10就更換。 所用電泳條件不合適 電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過 20V/cm，溫度 30℃ ，巨大 DNA鏈電泳， 溫度 15℃ ，檢查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換。 DNA上樣量過多 減少凝膠中 DNA上樣量 DNA含鹽過高 電泳前通過乙醇沉淀去除多余鹽分。 有蛋白污染 電泳前酚抽提去除蛋白。 DNA變性 電泳前勿加熱，用 20mM NaCl緩沖液稀 釋 DNA。 第四十四頁(yè)，共四十九頁(yè)。 2024/9/25 應(yīng)用 PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行的電泳檢測(cè)。 does matter ication appl 第四十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。 2024/9/25 應(yīng)用 瓊脂糖在其他方面的應(yīng)用 ⑴ 、 瓊脂糖在免疫擴(kuò)散法中的應(yīng)用。 ⑵ 瓊脂糖在雙鏈 DNA探針的合成方法中的作用。 does matter ication appl 第四十六頁(yè)，共四十九頁(yè)。 2024/9/25 [1] 劉陽(yáng) ,楊淑霞 ,賴翼等 .影響瓊脂糖凝膠電泳條帶扭曲程度的因素 [J].生物學(xué)雜志 ,2024,26(2):70:參考文獻(xiàn) 第四十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。 2024/9/25 THE END 第四十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。 內(nèi)容總結(jié) 2024/3/10。 RNA酶的蛋白抑制劑〔 RNasin〕：從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。 所有的玻璃器皿均應(yīng)在使用前于 180℃ 的高溫下干烤 6h或更長(zhǎng)時(shí)間。從富含 RNase的樣品〔如胰臟、肝臟〕中別離到的 RNA需溶解在去離子甲酰胺中存于 70℃ ，至少可以保存一年?？梢砸?RNA為模板合成 cDNA第一條鏈，或者以第一條 DNA鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈cDNA?！?3〕 3‘端要求。成像系統(tǒng)成像分析 第四十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。
外語(yǔ)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1