核酸的凝膠電泳-資料下載頁
2025-08-01 15:04本頁面
【正文】 rophoresis PFGE 為何選 PFGE？ 超過一定大小的線狀雙鏈 DNA分子在瓊脂糖凝膠中以相同速率遷移。大于該極限長度（ 40kb）后 DNA的遷移速率幾乎與分子大小無關(guān)，而主要決定于電場強度。但 PEGE 解決了這一問題。 （一） PFGE 工作的基本原理 這種電泳是在兩個不同方向的電場周期性交替進行的。 DNA分子在交替變換方向的電場中作出反應所需的時間取決于它的大小。 該法可分離長至 5Mb的 DNA分子。嚴格說來，應叫交替電場凝膠電泳。 B+ A +A B 脈沖電場電泳示意圖 （二） PEGE類型 ? 垂直脈沖場電泳系統(tǒng) (vertical pulsed field) ? 場翻轉(zhuǎn)系統(tǒng) (field inversion) ? 旋轉(zhuǎn)膠系統(tǒng) (rotating gel) ? 箝位勻強電場系統(tǒng) (contourclamped homogeneous electric field) A +A B +B 垂直交變電場系統(tǒng) 場翻轉(zhuǎn)系統(tǒng) 箝位勻強電場系統(tǒng) 旋轉(zhuǎn)膠系統(tǒng) A +A B +B A +A B +B + （三） 影響分辨率的因素 1 脈沖時間 （ )： 增加脈沖時間分離較大分子，減少脈沖時間分離較小分子。 2 電壓： 若固定脈沖時間，增加電場強度就增大了可分離最大片段的范圍，但是太大的電場強度會導致較小片段泳動的紊亂。 3 電場夾角： 電場方向的夾角常為 1100 1200，研究證實 900夾角也非常有效的。 4 溫度： 標準瓊脂糖電泳基本在室溫進行，PFGE一般應在 4℃ 進行。較高的溫度 DNA泳動較快；但是較高的溫度也引起較小片段的泳動截留和明顯的條帶變寬。 Hom
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