聚丙烯酰胺凝膠電泳(1)-資料下載頁
2025-05-12 21:19本頁面
【正文】 樣。 4. 樣品的處理及加樣 將樣品按 –1 mg/mL加樣品溶解液，溶解后，將其轉(zhuǎn)移到帶塞的小離心管中，輕輕蓋上蓋子 (不要塞緊，以免加熱時(shí)迸出 )，在 100℃ 沸水浴中加熱3min，取出冷卻后加樣。 用微量進(jìn)樣器取 25 ?l上述混合液，通過緩沖液，小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部。 5 .電泳 將電泳儀的正極與下槽連接，負(fù)極與上槽連接，接通冷卻水，打開電泳儀開關(guān)，開始時(shí)電流為 10 mA，待樣品進(jìn)入分離膠后，將電流調(diào)至 2030 mA，當(dāng)溴酚藍(lán)染料距硅膠框 1 cm時(shí)，停止電泳，關(guān)閉電源及冷卻水。 6 .染色與脫色 電泳結(jié)束后 ， 取下凝膠模 ， 卸下硅膠框 ， 用不銹鋼藥鏟或鑷子撬開短玻璃板 ， 從凝膠板上切下一角作為加樣標(biāo)記 ， 在兩側(cè)溴酚藍(lán)染料區(qū)帶中心 ， 插入細(xì)銅絲作為前沿標(biāo)記 。 加入染色液染色 12 h， 再用脫色液脫色 ，直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰 ， 即可計(jì)算相對(duì)遷移率 。 7. 結(jié)果處理 量出加樣端距細(xì)銅絲間的距離 (cm)以及各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與加樣端的距離 (cm)， 按下式計(jì)算相對(duì)遷移率 mR: 相對(duì)遷移率 mR= 蛋白質(zhì)樣品距加樣端遷移距離 (cm) 溴酚藍(lán)區(qū)帶中心距加樣端距離 (cm) 六 、 注意事項(xiàng) （ 1） 安裝電泳槽時(shí)要注意均勻用力旋緊固定螺絲 ， 避免緩沖液滲漏 。 （ 2） 用瓊脂 (糖 )封底及灌膠時(shí)不能有氣泡 ， 以免電泳時(shí)影響電流的通過 。 （ 3）樣品中應(yīng)含一定濃度的蔗糖溶液，目的是用以防止樣品因?qū)α鞫幌♂尅? （ 4）加樣時(shí)樣品不能超出凹形樣品槽。加樣槽中不能有氣泡，如有氣泡，可用注射器針頭挑除。 七 、 思考題 (1)為什么要在樣品中加少許溴酚蘭和一定濃度的蔗糖溶液 ？ 蔗糖及溴酚蘭的作用分別是什么 ？
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