盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)-資料下載頁
2025-08-09 17:52本頁面
【正文】 含 ％溴酚藍(lán)指示劑），沿管壁加到濃縮膠頂上，加樣針頭離膠頂 1 mm處，勿碰到膠面。然后用滴管沿管壁加電極緩沖液至管頂。最后，在上極槽中倒入電極緩沖液約 150 ml。 5．電泳 電泳槽上槽接負(fù)極、下槽連正極，然后通電。 先恒流 ：開始用 1～ 2 mA／管，電泳 30 min后調(diào)至恒壓 ，電壓為 290～ 300 V(即 50 V／管 )。電泳過程中要保持電壓穩(wěn)定，否則電壓過高會(huì)造成發(fā)熱，使分離失敗。 通電 2． 5 h左右 ，待溴酚藍(lán)指示液 離管底 1 cm處停止電泳，取出凝膠管。 6．剝膠 用一長針頭注射器吸滿水，將針頭插入凝膠與管壁之間，慢慢旋轉(zhuǎn)玻管，一邊壓入水，一邊使針頭慢慢呈螺旋式地前進(jìn)，靠水流壓力和潤滑力將玻管內(nèi)壁與凝膠分開，最后用 吸耳球 在玻管一端輕輕加壓，或用針輕輕壓凝膠條，使其滑在干凈的燒杯中。剝膠時(shí)注意不要損傷凝膠表面。 7．染色、漂洗 燒杯中加人氨基黑染色液，在 90℃ 水浴中加熱約 5min。先用蒸餾水漂洗去膠條表面的染色液，然后再在燒杯中倒入 7%醋酸漂洗液 ，經(jīng)常更換漂洗液， 漂洗 2～ 3天直至背景顏色去除為止 。 漂洗凈的膠條可放入裝有 7%醋酸溶液的試管中保存，以備鑒定和照相。 8．結(jié)果觀察與繪圖 四、實(shí)驗(yàn)建議 電泳時(shí)，電泳儀與電泳槽間正、負(fù)極不能接錯(cuò)，以免樣品反方向移動(dòng)。電泳時(shí)應(yīng)選用合適的電流、電壓，過高或過低均可影響電泳效果。 電泳后，應(yīng)分別收集上、下貯槽電極緩沖液，在冰箱中貯存，可用 2～ 3次。為保證電泳結(jié)果滿意，最好用新稀釋的緩沖液。 五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及作業(yè) 繪出盤狀電泳圖譜
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