sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量-資料下載頁
2025-05-07 18:13本頁面
【正文】 接正極 ， 打開直流電源 ， 剛開始時 ， 電壓控制在不高于 100V，樣品進入分離膠后 ， 電壓控制在不高于140V。 待指示劑染料靠遷移至下沿 1～ 。 九 、 染色和脫色 小心將膠取出 ， 放入一大培養(yǎng)皿中 。 染色： 加入染色液 ， 置于搖床上染色 2h。 脫色： 染色完畢 ， 倒出染色液 ， 加入脫色液 ，置于搖床上脫色 ， 數(shù)小時更換一次脫色液 ，直至背景清晰 ， 拍照 。 十 、 相對分子質(zhì)量的計算 量出分離膠頂端距溴酚藍間的距離 (cm)以及各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與分離膠頂端的距離 (cm)， 按下式計算相對遷移率 mR: 相對遷移率 mR= 以標準蛋白質(zhì)分子量的對數(shù)對相對遷移率作圖，得到標準曲線，根據(jù)待測樣品相對遷移率，從標準曲線上計算出其分子量。 蛋白質(zhì)樣品距分離膠頂端遷移距離 (cm) 溴酚藍區(qū)帶中心距分離膠頂端距離 (cm) 思考題 ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ， 當分離膠加完后 ， 需在其上加一層水 ， 為什么 ? ? 電極緩沖液中甘氨酸的作用 ? ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ， 分離膠與濃縮膠中均含有 TEMED和 AP， 試述其作用 ? ? 樣品液為何在加樣前需在沸水中加熱幾分鐘 ?
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