sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量-資料下載頁(yè)
2025-05-07 18:13本頁(yè)面
【正文】 接正極 ， 打開直流電源 ， 剛開始時(shí) ， 電壓控制在不高于 100V，樣品進(jìn)入分離膠后 ， 電壓控制在不高于140V。 待指示劑染料靠遷移至下沿 1～ 。 九 、 染色和脫色 小心將膠取出 ， 放入一大培養(yǎng)皿中 。 染色： 加入染色液 ， 置于搖床上染色 2h。 脫色： 染色完畢 ， 倒出染色液 ， 加入脫色液 ，置于搖床上脫色 ， 數(shù)小時(shí)更換一次脫色液 ，直至背景清晰 ， 拍照 。 十 、 相對(duì)分子質(zhì)量的計(jì)算 量出分離膠頂端距溴酚藍(lán)間的距離 (cm)以及各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與分離膠頂端的距離 (cm)， 按下式計(jì)算相對(duì)遷移率 mR: 相對(duì)遷移率 mR= 以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量的對(duì)數(shù)對(duì)相對(duì)遷移率作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)待測(cè)樣品相對(duì)遷移率，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出其分子量。 蛋白質(zhì)樣品距分離膠頂端遷移距離 (cm) 溴酚藍(lán)區(qū)帶中心距分離膠頂端距離 (cm) 思考題 ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ， 當(dāng)分離膠加完后 ， 需在其上加一層水 ， 為什么 ? ? 電極緩沖液中甘氨酸的作用 ? ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ， 分離膠與濃縮膠中均含有 TEMED和 AP， 試述其作用 ? ? 樣品液為何在加樣前需在沸水中加熱幾分鐘 ?
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1