浙江大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)甲sds—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量-資料下載頁(yè)
2025-01-16 05:47本頁(yè)面
【正文】 25 ul SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 樣品的提取及處理 ?⑴ 、 樣品的提取 ? 取新鮮葉片 ， 沖洗干凈 ， 吸干表面水分 ， 去掉葉脈 ，稱(chēng)取去脈葉片 ， 加入 沖液 2ml， 加石英砂少許研磨成勻漿 ， 10000r/min離心 10min， 上清備用 。 ?⑵ 、 樣品的處理 ? 取 30ul待測(cè)樣品的上清于離心管中 ， 加入 30ul濃樣品溶解液 ， 混勻 ， 置于 100℃ 水浴中保溫 3~5min，取出冷卻備用 。 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 若待測(cè)樣品濃度太稀應(yīng)事先濃縮；若樣品鹽濃度太高則需先行透析 ， 再進(jìn)行上述處理 。 ? 其它操作步驟及注意事項(xiàng)解說(shuō)詳見(jiàn) P68。 ?、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及處理 ? 用直尺分別量出染料的遷移距離和各樣品區(qū)帶的遷移距離 ， 如圖所示： ? ? 按下列公式計(jì)算相對(duì)遷移率 mR： 0 加樣 濃縮膠 染料遷移距離 樣品遷移距離 染料位置 電泳方向 分離膠 樣品遷移距離 （ cm） 染料遷移距離 （ cm） 相對(duì)遷移率 mR = SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量的對(duì)數(shù)對(duì)相對(duì)遷移率作圖 ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 并根據(jù)待測(cè)樣品的相對(duì)遷移率 ， 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其分子量 。
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