sds聚丙烯酰胺凝膠電泳(1)-資料下載頁
2025-05-10 13:12本頁面
【正文】 加入 10181。l 2倍樣品緩沖液，上樣量分別為 5181。l和 3181。l。 ,加樣前 ,樣品在 沸水中加熱 3分鐘，去掉亞穩(wěn)態(tài)聚合。 ※ 注射器不可過低 ,以防刺破膠體 ,也不可過高 ,在樣下 沉?xí)r會發(fā)生擴散 . ※ 為避免邊緣效應(yīng) ,最好選用中部的孔注樣 . ， 接通電源，進(jìn)行電泳 ，開始電流恒定在 10mA，當(dāng)進(jìn)入分離膠后改為 20mA，溴酚藍(lán)距凝膠邊緣約 5mm時，停止電泳。 與 染色 ：電泳結(jié)束后，撬開玻璃板，將凝膠板做好標(biāo)記后放在大培養(yǎng)皿內(nèi)，加入染色液，染色 1小時左右。 ：染色后的凝膠板用蒸餾水漂洗數(shù)次，再用脫色液脫色，直到蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰。 ※ 剝膠時要小心 ,保持膠完好無損 ,染色要充分 . . 。 五 .分析計算 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線： 按下式計算相對遷移率： 以每個蛋白標(biāo)準(zhǔn)的分子量對數(shù)對它的相對遷移率作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，量出未知蛋白的遷移率即可測出其分于量，這樣的標(biāo)難曲線只對同一塊凝膠上的樣品的分子量測定才具有可靠性。 = 蛋 白 樣 品 距 加 樣 端 遷 移 距 離 （ c m ）溴 酚 藍(lán) 區(qū) 帶 中 心 距 加 樣 端 距 離 （ c m ） 相 對 遷 移 率六 .思考題 ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ,當(dāng)分離膠加完后 ,需在其上加一層水 ,為什么 ? ? 樣品溶解液中各種試劑的作用是什么 ? ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ,分離膠與濃縮膠中均含有 TEMED和 AP,試述其作用 ? 思考題： 注意事項 ? 丙烯酰胺具有中等毒性。常人每天允許的最大暴露量不超過 ，皮膚接觸可致中毒，癥狀為紅斑、脫皮、眩暈、動作機能失調(diào)、四肢無力等。 ? 丙烯酰胺是神經(jīng)毒劑，可以透過皮膚 ? 不要接觸皮膚，戴手套、口罩操作 注意事項： ? 沒有聚合的丙烯酰胺不要傾倒到水源附近 ? 一定要催化充分，使之完全聚合 ? 集中處理，實驗中全部的膠由專門受過訓(xùn)練的人收集到一起，在一個特殊標(biāo)明的容器中保存，并進(jìn)一步催化使之反應(yīng)完全，最后送交學(xué)校危險品倉庫，統(tǒng)一處理。
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