sds—聚丙烯酰胺垂直平板電泳-資料下載頁
2025-05-10 13:12本頁面
【正文】 接電泳儀 負(fù)極 ， 下電極 接電泳儀 正 極 ， 開啟電泳儀，使 穩(wěn)壓 ： 120伏特 。待溴酚蘭指示前 沿到達(dá)下端時(shí)（ 3少時(shí)左右），關(guān)閉電泳儀，停止電泳 5處理凝膠區(qū)帶 54染色 將垂直平板電泳槽上的玻璃平板輕輕扳開，用不銹鋼小鏟刀， 將凝膠板從電泳槽上面鏟下來， 放入一合適的干凈培養(yǎng)皿內(nèi)，然后加入適量染色液，于搖床上 進(jìn)行振搖固定染色 30分鐘，完畢，在培養(yǎng)皿中用清水洗 23遍。 54脫色 在培養(yǎng)皿內(nèi)加入適量脫色液于搖床上進(jìn)行振搖（ 2小時(shí) /次， 需 3次）脫色多次直至色帶完全清晰為止 。 5鑒定 最后根據(jù)染色所出現(xiàn)的區(qū)帶，測(cè)量和記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中 各蛋白質(zhì)的遷移率，繪制出類似凝膠板的圖形，以標(biāo)準(zhǔn)品中 的各自蛋白質(zhì)的遷移距離（ cm）為橫坐標(biāo)和相對(duì)應(yīng)的對(duì)數(shù)分 子量（ Log MW）為縱坐標(biāo)，繪制低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并 從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖上查出樣品蛋白質(zhì)的分子量，亦可采用半對(duì)數(shù) 坐標(biāo)紙的作圖方式，還可以用 Excel方法直接計(jì)算打印出相 關(guān)圖和計(jì)算結(jié)果。 作業(yè)建議 表 1：標(biāo)準(zhǔn)品各蛋白質(zhì)分子量及相應(yīng)對(duì)數(shù)分子量和遷移率表 名 稱 分子量（ MW） （道爾頓） 對(duì)數(shù)分子量 （ Log MW） 遷移率 （ CM） 兔 磷 酸 化 酶 B 97,400 牛 血 清 白 蛋 白 66,200 兔 肌 動(dòng) 蛋 白 43,000 牛 碳 酸 酐 酶 31,000 胰 蛋 白酶 抑制劑 20,100 雞 蛋 清 溶 菌 酶 14,400 表 1：標(biāo)準(zhǔn)品各蛋白質(zhì)分子量及相應(yīng)對(duì)數(shù)分子量和遷移率表 Fermentas公司 名 稱 分子量（ MW） （道爾頓） 對(duì)數(shù)分子量 （ Log MW） 遷移率 （ CM） B半乳糖苷酶 117,000 牛 血 清 白 蛋 白 85,000 卵 清 蛋 白 48,000 碳 酸 酐 酶 34,000 乳球 蛋 白 26,000 雞 蛋 清 溶 菌 酶 14,900 圖 2：蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖y = + R2 = 450 2 4 6 8蛋白質(zhì)遷移率(MW )Log MW特別提醒 一定要給出文字性的結(jié)果
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