sds—聚丙烯酰胺垂直平板電泳(參考版)
2025-05-14 13:12本頁(yè)面
【正文】 5鑒定 最后根據(jù)染色所出現(xiàn)的區(qū)帶，測(cè)量和記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中 各蛋白質(zhì)的遷移率，繪制出類(lèi)似凝膠板的圖形，以標(biāo)準(zhǔn)品中 的各自蛋白質(zhì)的遷移距離（ cm）為橫坐標(biāo)和相對(duì)應(yīng)的對(duì)數(shù)分 子量（ Log MW）為縱坐標(biāo)，繪制低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并 從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖上查出樣品蛋白質(zhì)的分子量，亦可采用半對(duì)數(shù) 坐標(biāo)紙的作圖方式，還可以用 Excel方法直接計(jì)算打印出相 關(guān)圖和計(jì)算結(jié)果。待溴酚蘭指示前 沿到達(dá)下端時(shí)（ 3少時(shí)左右），關(guān)閉電泳儀，停止電泳 5處理凝膠區(qū)帶 54染色 將垂直平板電泳槽上的玻璃平板輕輕扳開(kāi)，用不銹鋼小鏟刀， 將凝膠板從電泳槽上面鏟下來(lái)， 放入一合適的干凈培養(yǎng)皿內(nèi)，然后加入適量染色液，于搖床上 進(jìn)行振搖固定染色 30分鐘，完畢，在培養(yǎng)皿中用清水洗 23遍。 5電泳 加完樣品和電極液后，接上上、下電極的電源（電極一定要浸入電極 溶液內(nèi)） 。 5 加標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液 52加樣量 ： 用微量注射器吸取 （ 1）、溴酚蘭溶液 10ul (%溴酚蘭 ) （ 2）、標(biāo)準(zhǔn)品溶液 10ul (200 ul/小小瓶 ) （ 3）、樣品溶液 5ul （ mg/ml） 52加樣方法 （ 1）、先加樣，后加電極溶液 ： 分別小心將樣液加注到平板槽內(nèi)的各自標(biāo)記齒孔內(nèi)（各孔內(nèi)的樣品不能相混），加樣完畢后 , 將準(zhǔn)備好的電極溶液分別輕輕倒入上、下電極槽內(nèi)，特別是在加注上電極溶液時(shí)，一定要沿槽內(nèi)壁輕輕加入，以防沖動(dòng)各齒孔內(nèi)的樣品液所引起相互混合和擴(kuò)散。 （ 4）、堆集膠聚合后（如果堆集膠面不用梳板，則可加水層以使界 面平整），將梳板輕輕垂直地從頂槽內(nèi)取出，這時(shí)即可出現(xiàn) 一個(gè)個(gè)齒孔（凹槽）。 （ 3）、再將梳板的梳齒插入到平板頂部的槽內(nèi)，并保證梳齒的 2/3 部分浸沒(méi)在堆集膠液內(nèi)（如高度不夠，可適量添加貯液）。 （ 4）、 聚合后將蒸餾水輕輕倒掉，并用吸水紙輕輕吸去 垂直玻璃平板槽殘留的蒸餾水。 表 1：分離膠及濃縮膠的配制 名 稱(chēng) 體 積 [ml] 名 稱(chēng) 體 積 [ml] 12%分離膠 [ ] 5%濃縮膠 [ ] DDW DDW 30% Arc + Bis 30% Arc + Bis Tris （ ） Tris（ ） 10% SDS 10% SDS 10% AP 10% AP TEMED ul TEMED ul 51分離膠的制備 (1) 、 取一小燒杯 ,按表 1比例配制分離膠 . （ 2）、 用帶有長(zhǎng)針頭的注射器吸取分離
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