實驗八sds-聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì)(參考版)
2024-10-03 09:14本頁面
【正文】 加樣槽中不能有氣泡，如有氣泡，可用注射器針頭挑除。 （ 3）樣品中應(yīng)含一定濃度的蔗糖溶液，目的是用以防止樣品因?qū)α鞫幌♂尅? 7. 結(jié)果處理 量出加樣端距細銅絲間的距離 (cm)以及各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與加樣端的距離 (cm)， 按下式計算相對遷移率 mR: 相對遷移率 mR= 蛋白質(zhì)樣品距加樣端遷移距離 (cm) 溴酚藍區(qū)帶中心距加樣端距離 (cm) 六 、 注意事項 （ 1） 安裝電泳槽時要注意均勻用力旋緊固定螺絲 ， 避免緩沖液滲漏 。 6 .染色與脫色 電泳結(jié)束后 ， 取下凝膠模 ， 卸下硅膠框 ， 用不銹鋼藥鏟或鑷子撬開短玻璃板 ， 從凝膠板上切下一角作為加樣標(biāo)記 ， 在兩側(cè)溴酚藍染料區(qū)帶中心 ， 插入細銅絲作為前沿標(biāo)記 。 用微量進樣器取 25 ?l上述混合液，通過緩沖液，小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部。靜置電泳槽， 10 min左右，上膠即可聚合，再放置 1020 min，加入電極緩沖液，使液面沒過短玻璃板約 cm，輕輕取出樣品槽模板，即可加樣。 約 3060 min凝膠完全聚合，則可看到水與凝固的膠面有折射率不同的界線。 ? 2 配膠表 SDS – 不連續(xù)體系凝膠的制備配制 20 mL 不同濃度的分離膠 配制 10 mL 濃縮試劑名稱 所需試劑用量 / mL 所需試劑用量 / mL% 1 0% 15% 3%凝膠貯液 5 .00 分離膠緩沖液( T ris HC l ) 2 .50 —濃縮膠緩沖液( T ris HC l ) — — — 10%TEMED 10 ％ SDS 重蒸水 1 混勻后，置真空
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