血清蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳(參考版)
2025-01-09 09:06本頁(yè)面
【正文】 3. 加速劑（ TEMED）要密封保存，過硫酸溶液現(xiàn)配現(xiàn)用， 防止氧化失效。 ? 結(jié)果示意圖 γ β α2 α1 注意事項(xiàng)： 1. 丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經(jīng)毒性試劑，對(duì)皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸 2. 丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺溶液應(yīng)裝在棕色瓶中，用前檢測(cè) pH值是否失效。 5. 剝膠 注入蒸餾水做潤(rùn)滑劑，針頭螺旋式前進(jìn)，緩緩剝離。 ? 實(shí)驗(yàn)器材與試劑 一． 器材 圓盤電泳槽、電泳儀、脫色搖床、染缸、微量加樣器、注射器、小燒杯 二． 試劑（ 緩沖液 PH值準(zhǔn)確配置后用 PH計(jì)調(diào)試 ） 試劑編號(hào) 試劑名稱 配置 1 4*分離膠緩沖液 1mol/L鹽酸 , Tris (pH ) 2 30%單體交聯(lián)劑 丙烯酰胺 100mL 3 催化劑 10%過硫酸銨 （ 臨用前配置 ） 4 加速劑 TEMED 1mL加蒸餾水到 10mL 5 4*濃縮膠緩沖劑 mol/L 鹽酸 48mL/100mL, Tris () 6 10*電極緩沖劑 甘氨酸 Tris 加蒸餾水至 100mL 稀釋 (pH )臨用前十倍稀釋 7 2*上樣緩沖劑 溴酚藍(lán) 20mL甘油 ，加 5號(hào)試劑 25mL，定溶至 100mL 8 固定液 三氯乙酸 加蒸餾水至 100mL 9 考馬斯亮藍(lán) R250染色液 R250,溶于 227mL甲醇中加蒸餾水 227mL冰醋酸 46mL 10 脫色液 甲醇 :冰醋酸 :水按 3:1:6比例配合 ? 實(shí)驗(yàn)操作 1. 凝膠柱的準(zhǔn)備 （凝膠溶液配制表見教材表 44） 取玻璃管 ，一 段 封 口 加入分離膠溶液 ( 7 cm) 加入蒸餾水 制備分離膠應(yīng)迅速 為了使表面平整，與空氣隔絕 靜置待凝膠聚合 濃縮膠制備(1cm) 吸取上表面蒸餾水 待凝
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