sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳page及(參考版)
2025-05-15 23:29本頁面
【正文】 一張膜可以重復使用 3－ 4次 。用濾紙將膜邊的殘余液體吸凈后，折回保鮮膜，將之放到壓膜用的夾板里 轉膜 戴手套，避免用手接觸濾紙、凝膠和膜，因為手上的油脂會阻斷轉移 濾紙和膜的尺寸與凝膠大小一致 以適量的轉移 Buffer室溫平衡濾紙、凝膠和膜 5min 方向正確：凝膠在陰極，膜在陽極 排去濾紙、膠和膜間的氣泡 電轉時間： 200mA 12h,轉移結束后， 膜用麗春紅染色觀察蛋白分子量標準的位置 （ 3）封閉 5％脫脂奶粉或 3％ BSA （含 ％ Tween20 TBS或 PBS配制） 時間：室溫 3h或 4186。 注避免產生氣泡 ， 如有氣泡 ， 可用鑷子將膜的四角輕輕提起 ， 排出氣泡 4 蓋上玻璃平皿 ， RT下孵育 2hours 5 TBST 10min 2 ； TBS 10min 1 二 抗 ， 加 1： 1000 的二抗1000ul（ 1ul mouse 抗人 IgGHRP+ 999ul抗體稀釋液 ） ， 要避免產生氣泡 3. 蓋上平皿 ， 同上 RT孵育 2 hours 4. TBST 10min 2 ； TBS 10min 1 顯 色 1 鋪好保鮮膜，分別滴加 5滴發(fā)光試劑 A和 B，混合 1min 2 同上蛋白面朝下放好尼龍膜，要避免產生氣泡。 3. 再用去離子水洗膜至紅色完全褪去 封閉 1. 取出兩塊膜 ， 用濾紙將殘留液體吸凈后 ，將兩塊膜的蛋白面相對放入封閉液 2. RT， 12hours 或 4℃ 過夜 一抗 1 把膜從冰箱中取出 ， RT ， 30min。 紅對紅 ， 黑對黑接好轉膜裝置 （ 及電泳裝置 ） 。 并加一塊冰在電泳槽中 ， 以防轉膜過程中溫度過高 ， 影響轉膜效率 。然后，在膜上加一點緩沖液，用玻璃棒盡量使之鋪平 3 在膜上依次放好三張濾紙和海綿后 ， 即可夾好轉膜模具 。 2 放好膠后，放尼龍膜。 4 在模具的黑色板上先鋪一塊海綿，接著依次放 3張浸濕的濾紙，對齊后，用玻璃棒趕凈氣泡（很關鍵）。 2 在轉膜前 10min，把膜取出浸入轉移緩沖液中。 SDS電泳的樣品緩沖液離子強度較低，通常是 10～ 100mmol/L 轉膜 1 帶手套切 2張（ L： ， W： ）尼龍膜和 12張（ L：， W： ）的濾紙，并用去離子水浸泡（浸泡時要讓水從下往上慢慢濕透）過午。 （ 10）固定液： 50%甲醇 454ml，冰乙酸 46ml混勻。如果凝的太快，可能是 APS和 TEMED用量過多，此時膠太硬易裂 試劑配制 (1) 30%丙烯酰胺（ Acr）：稱 Acr30g，甲叉雙丙
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