聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳-資料下載頁(yè)
2025-05-12 21:19本頁(yè)面
【正文】 成 x ,撥去上下覆蓋的保護(hù)紙 ,取出 8層擦鏡紙作為加樣紙 ,根據(jù)樣液濃度調(diào)節(jié)加樣紙的層數(shù) (標(biāo)準(zhǔn)樣 4層 ,其它樣液均為 8層 ). (7)加樣 : 將加樣紙分別吸取樣液 ,成一字形排放在兩電極之間的凝膠中央 . (8)連接電極 : 將電極線的插頭插入電極板的插孔內(nèi) ,蓋上電極板 ,使鉑金絲壓在電極條上 .蓋上安全罩 ,接通冷凝水 . (9)電泳 : 將電泳儀正極輸出端與磷酸電極條相連 , 負(fù)極輸出端與NaOH電極條相連 ,接通電源 ,60V恒壓 15min, 8mA恒流至電壓上升到 550V,關(guān)閉電源 ,揭去加樣紙 , 然后在 550V恒壓 3小時(shí)左右 ,等電流降至接近于零 ,停止電泳 . (10)固定 : 取出凝膠 ,浸泡在 40ml的固定液中 搖動(dòng)約 30min,傾出固定液 .再加入 60ml的固定液過(guò)夜 . (11)染色 : 傾出固定液 ,用蒸餾水漂洗一次 ,加入考馬斯亮藍(lán) R250溶液染色 60分鐘 . (12) 脫色 : 傾出染色液 (回收染色液 ).加入少量的脫色液脫色 ,直至背景清楚 . (13)計(jì)算等電點(diǎn) : 量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白的相對(duì)遷移率 ,繪制等電點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線 ,計(jì)算未知蛋白等電點(diǎn) .
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