盤(pán)狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)(專(zhuān)業(yè)版)
【正文】 剝膠時(shí)注意不要損傷凝膠表面。 將已制成分離膠的玻管倒立于濾紙上除去水，再用濾紙條吸去殘留的水，注意不要碰到膠面。 ?Cl離子泳動(dòng) 最快 而居先，稱(chēng)“ 前導(dǎo)離子 ” (1eading ion)， NH2CH2COO離子 最慢 而殿后，稱(chēng)“ 尾隨離子 ” (trailing ion)。聚丙烯酰胺凝膠電泳應(yīng)用范圍廣， 可用于 蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物大分子的 分離、定性、定量及少量的制備，還可以測(cè)定分子量、等電點(diǎn)等 。 (一 )聚合反應(yīng) 聚丙烯酰胺是由 Acr和 Bis在 催化劑 過(guò)硫酸銨 (ammonium persulfate， (NH4)2S2O8簡(jiǎn)稱(chēng)AP)或 核黃素 (ribofavin，即 vitaminB2，C17H20O6N4)和 加速劑 N， N， N’， N’一四甲基乙二胺 (N， N， N， N’一 tetramethyl ethytenediamine，簡(jiǎn)稱(chēng) TEMED)的作用下，聚合而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。這樣，在快離子的后面形成一條離子濃度低的 低電導(dǎo)區(qū) ，從而產(chǎn)生 較高的電壓梯度 而加速了蛋白質(zhì)的泳動(dòng)。用滴管吸少量的濃縮膠液洗一下凝膠頂。 7．染色、漂洗 燒杯中加人氨基黑染色液，在 90℃ 水浴中加熱約 5min。 6．剝膠 用一長(zhǎng)針頭注射器吸滿(mǎn)水，將針頭插入凝膠與管壁之間，慢慢旋轉(zhuǎn)玻管，一邊壓入水，一邊使針頭慢慢呈螺旋式地前進(jìn)，靠水流壓力和潤(rùn)滑力將玻管內(nèi)壁與凝膠分開(kāi)，最后用 吸耳球 在玻管一端輕輕加壓，或用針輕輕壓凝膠條，使其滑在干凈的燒杯中。 3．濃縮膠 (大孔膠 )的制備 在小燒杯中，分別加入 ④液 1 ml，⑤液 2 ml，蒸餾水 1ml，⑥液 4 ml，輕輕搖勻，然后放在暗
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