盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)-閱讀頁
2024-08-28 17:52本頁面
【正文】 小管中聚合而成。整個系統(tǒng)用多相 (不連續(xù) )緩沖液。電泳后，取出凝膠柱作固定和染色處理，顯示特定蛋白質(zhì)的位置。然后用長滴管吸取此液加入玻璃管中，沿玻管壁緩緩注入蒸餾水，水層 3～ 5mm高，加蒸餾水的 目的 是 防止空氣 中的氧妨礙凝膠的形成，以及 消除液柱表面的彎月面。 將已制成分離膠的玻管倒立于濾紙上除去水，再用濾紙條吸去殘留的水，注意不要碰到膠面。然后把此凝膠管垂直插在一個支架上 (這個支架可用一塊木板，上面釘兩個釘子，長釘之間套兩道橡皮筋制成 )，用滴管加上述濃縮膠 ，上面加水層，操作同分離膠制備。開始顯 淡黃色 ，5～ 6 min后逐漸轉(zhuǎn) 乳白色 ，表明聚合開始，繼續(xù)光照 20～ 30 min，使聚合完全。把凝膠管插到電泳槽的橡皮圈內(nèi)，注意垂直。用 1ml注射器吸 50 ul樣品液（含 ％溴酚藍指示劑），沿管壁加到濃縮膠頂上，加樣針頭離膠頂 1 mm處，勿碰到膠面。最后，在上極槽中倒入電極緩沖液約 150 ml。 先恒流 ：開始用 1～ 2 mA／管，電泳 30 min后調(diào)至恒壓 ，電壓為 290～ 300 V(即 50 V／管 )。 通電 2． 5 h左右 ，待溴酚藍指示液 離管底 1 cm處停止電泳，取出凝膠管。剝膠時注意不要損傷凝膠表面。先用蒸餾水漂洗去膠條表面的染色液，然后再在燒杯中倒入 7%醋酸漂洗液 ，經(jīng)常更換漂洗液， 漂洗 2～ 3天直至背景顏色去除為止 。 8．結(jié)果觀察與繪圖 四、實驗建議 電泳時，電泳儀與電泳槽間正、負極不能接錯，以免樣品反方向移動。 電泳后，應分別收集上、下貯槽電極緩沖液，在冰箱中貯存，可用 2～ 3次。 五、實驗報告及作業(yè) 繪出盤狀電泳圖譜
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