sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳-閱讀頁
2025-05-22 18:13本頁面
【正文】 橢圓棒 （ 2）短軸對不同的蛋白質(zhì)亞基 SDS膠束基本上是相同的。 膠束在 SDSPAGE系統(tǒng)中的電泳遷移率不再受蛋白質(zhì)原有電荷的影響，而主要 取決于橢圓棒的長軸長度 ，即蛋白質(zhì)或亞基分子量的大小。 （ 3） 二硫鍵是否完全被還原 當(dāng)二硫鍵被 徹底還原 后，蛋白質(zhì)分子才能 被解聚 ， SDS才能定量地結(jié)合到亞基上而給出相對遷移率和分子量對數(shù)的線性關(guān)系。 電泳緩沖液的種類： 磷酸緩沖液 Tris醋酸鈉緩沖系統(tǒng) 咪唑緩沖液系統(tǒng)： 比磷酸緩沖系統(tǒng)的導(dǎo)電性低，電泳速 度要比后者快一倍。 Tris甘氨酸 系統(tǒng)： 使用最多的緩沖液 Tris硼酸鹽緩沖液： 測定糖蛋白的分子量 （三）凝膠濃度的選擇 由于 SDS電泳分離并不取決于蛋白質(zhì)的電荷密度，只取決于分子解聚后SDS蛋白質(zhì)膠束的大小，因此凝膠濃度的選擇會(huì)直接影響分辨率。 測量位置應(yīng)在蛋白帶的中央。 ②帶有烷基化作用的還原 SDS處理 烷基化作用 可以很好地并經(jīng)久牢固地保護(hù) SH基團(tuán)，而得到窄的電泳帶。 （ 4） 電泳 （ 5） 固定 （ 6） 染色 考馬斯亮藍(lán)（ coomassie brilliant blue） ① R250 三苯基甲烷，紅藍(lán)色，每個(gè)分子含有兩個(gè) SO3H基團(tuán)，偏酸性，和氨基黑一樣也是結(jié)合在蛋白質(zhì)的堿性基團(tuán)上。 銀染色 銀染的機(jī)制是將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子） 還原成金屬銀 ，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。 （ 2） “ 皺眉 ” 現(xiàn)象 由于垂直電泳槽的 裝置不合適 引起的，特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的“ 三明治 ” 底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全。 （ 4） “ 紋理 ” 現(xiàn)象 由于樣品中的 不溶顆粒
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