sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量-閱讀頁
2025-05-22 18:13本頁面
【正文】 率與分子量的自然對數(shù)值呈反比，符合下列方程： lnMr =－ bmR+K 式中： Mr為蛋白質(zhì)分子量 ， mR為相對遷移率 ， b為斜率 ，K為截距 。 若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對分子量的對數(shù)作圖，可獲得一條 標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量 未知蛋白 在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對數(shù)與多肽鏈的相對遷移率成線性關(guān)系，所以可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求未知多肽鏈分子量 。 將電泳槽 、 凝膠模子串成一體的垂直板型電泳裝置 ， 垂直放置在水平臺面上 ， 灌注膠液 。 待分離膠凝固后 ，倒出蒸餾水 ， 用濾紙吸干 。 六 、 樣品的準(zhǔn)備 在低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)和待測樣品中分別加入適量還原緩沖液 ， 放入沸水浴中加熱 3~5min， 取出冷至室溫 。同時加入Marker。 待指示劑染料靠遷移至下沿 1～ 。 染色： 加入染色液 ， 置于搖床上染色 2h。 十 、 相對分子質(zhì)量的計算 量出分離膠頂端距溴酚藍(lán)間的距離 (cm)以及各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與分離膠頂端的距離 (cm)， 按下式計算相對遷移率 mR: 相對遷移率 mR= 以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量的對數(shù)對相對遷移率作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)待測樣品相對遷移率，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出其分子
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