盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)-在線瀏覽
2024-09-19 17:52本頁面
【正文】 用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結構的凝膠。其次，此凝膠電泳還有一種獨特的 濃縮效應 ，因而較醋酸纖維薄膜電泳，瓊脂糖電泳等具有更高的分辨率。聚丙烯酰胺凝膠電泳應用范圍廣， 可用于 蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物大分子的 分離、定性、定量及少量的制備，還可以測定分子量、等電點等 。催化劑和加速劑的種類很多，目前常用的有 2種催化體系。 2．核黃素一 TEMED 光聚合 作用 TEMED可加速凝膠的聚合，但不加也可聚合。但過量氧會阻止鏈長的增加，因此應避免過量氧的存在。 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (polyacryamide gel electrophoresis簡稱 PAGE)根據(jù)其有無濃縮效應，分為 連續(xù)系統(tǒng)與不連續(xù)系統(tǒng)兩大類 。目前常用的多為垂直的 圓盤 及板狀 兩種。濃縮膠是核黃素催化聚合而成的大孔膠，分離膠是由 AP催化聚而成的小孔膠，T=7． O％～ 7． 5％， C=％。 ?濃縮效應 ：由于緩沖體系中 pH值選擇不一 (濃縮膠緩沖液 pH6． 7，電極緩沖液 pH8． 3)導致 HCl中 Cl幾乎全部解離，甘氨酸中僅 ％～ l％解離為 NH2CH2COO，而蛋白質(zhì)在這種酸堿度中也解離為蛋白質(zhì)一 COO。 ?Cl離子泳動 最快 而居先，稱“ 前導離子 ” (1eading ion)， NH2CH2COO離子 最慢 而殿后，稱“ 尾隨離子 ” (trailing ion)。又因蛋白質(zhì)的泳動率介于快慢離子之間得以被濃縮為一條狹窄的盤形帶。 ?分子篩效應 ：當?shù)鞍踪|(zhì)夾在快慢離子間通過隔層進入分離膠時，尾隨離子由于 凝膠的 pH值與孔徑的突變 導致進一步解離而增速以至超過蛋白的泳動率，使 高電區(qū)梯度 不復存在。這種分子篩效應，使之泳動率仍有差異而得以分離。凝膠柱用丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺在垂直的玻璃
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