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盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)(留存版)

2024-09-17 17:52上一頁面

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【正文】 處。這三種帶負電荷的離子在電泳時,同時向正極泳動,但泳動率不同。 在一定濃度時,凝膠透明,有彈性,機械性能好,化學(xué)性能穩(wěn)定,與被分離物不起化學(xué)反應(yīng),幾乎無電滲作用,樣品不易擴散,用量少 (1~ 100μg)等優(yōu)點。催化劑和加速劑的種類很多,目前常用的有 2種催化體系。又因蛋白質(zhì)的泳動率介于快慢離子之間得以被濃縮為一條狹窄的盤形帶。然后把此凝膠管垂直插在一個支架上 (這個支架可用一塊木板,上面釘兩個釘子,長釘之間套兩道橡皮筋制成 ),用滴管加上述濃縮膠 ,上面加水層,操作同分離膠制備。先用蒸餾水漂洗去膠條表面的染色液,然后再在燒杯中倒入 7%醋酸漂洗液 ,經(jīng)常更換漂洗液, 漂洗 2~ 3天直至背景顏色去除為止 。 通電 2. 5 h左右 ,待溴酚藍指示液 離管底 1 cm處停止電泳,取出凝膠管。然后用長滴管吸取此液加入玻璃管中,沿玻管壁緩緩注入蒸餾水,水層 3~ 5mm高,加蒸餾水的 目的 是 防止空氣 中的氧妨礙凝膠的形成,以及 消除液柱表面的彎月面。 ?濃縮效應(yīng) :由于緩沖體系中 pH值選擇不一 (濃縮膠緩沖液 pH6. 7,電極緩沖液 pH8. 3)導(dǎo)致 HCl中 Cl幾乎全部解離,甘氨酸中僅 %~ l%解離為 NH2CH2COO,而蛋白質(zhì)在這種酸堿度中也解離為蛋白質(zhì)一 COO。其次,此凝膠電泳還有一種獨特的 濃縮效應(yīng) ,因而較醋酸纖維薄膜電泳,瓊脂糖電泳等具有更高的分辨率。 — TEMED 化學(xué)聚合 作用 TEMED 是一種脂肪族叔胺,其堿基可催化AP水溶液產(chǎn)生出游離氧原子,然后激活 Acr單體形成單體長鏈,在 Bis作用下聚合成凝膠。 ?電荷效應(yīng) :蛋白質(zhì)在界面上被高度濃縮后,雖形成一條狹帶,但因其中每一組分所帶荷電量不一,因而泳動率也有差
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