sdspage凝膠電泳(1)-資料下載頁
2025-05-07 18:13本頁面
【正文】 上樣緩沖液之四 單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求，因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定液。 Carnoy固定液（甲醇 :冰乙酸 =3:l） 每次使用前需臨時(shí)配制 ，長(zhǎng)時(shí)間放置影響固定效果，固定時(shí)間 15min至 24 h，冰箱、室溫均可。 甲醇 /冰醋酸固定液 甲醇 /冰醋酸固定液 甲醇 ： 有固定、硬化和脫水的作用?？梢怨潭ò椎鞍住⑶虻鞍?、核蛋白，但對(duì)核蛋白固定效果較差 (親和力小且易自溶 )。甲醇固定的特點(diǎn)是殺死快，滲透力強(qiáng)，對(duì)組織收縮較大 (可收縮 20?左右 )，可使材料變硬 。 冰醋酸 ： 純醋酸在溫度稍變低時(shí)即形成冰晶，所以又稱為冰醋酸。常用 ～ ?的濃度作為固定液。冰醋酸對(duì)材料有膨脹作用，對(duì)核蛋白固定好，可與水、酒精、氯仿混合。 染色劑 考馬斯亮藍(lán)染色 常用染色方法 銀染法 金屬離子染色法 以考馬斯亮藍(lán)染色為例 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，是利用蛋白質(zhì) ― 染料結(jié)合的原理，定量的測(cè)定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。 考馬斯亮藍(lán) 考馬斯亮藍(lán) 考馬斯亮藍(lán)最大光吸收在 488nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)?青色 ，蛋白質(zhì) 色素結(jié)合物在 595nm波長(zhǎng)下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán) G250結(jié)合在2min左右的時(shí)間內(nèi)達(dá)到平衡，完成反應(yīng)十分迅速；其結(jié)合物在室溫下 1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是 1976年 Bradford建立，試劑配制簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便快捷，反應(yīng)非常靈敏，可測(cè)定微克級(jí)蛋白質(zhì)含量，測(cè)定蛋白質(zhì)濃度范圍為 0～1000μg／ mL，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測(cè)定方法。 垂直板電泳裝置 加樣 樣品遷移方向 水平式電泳裝置 電泳緩沖液 凝膠 電泳過程中分子遷移的規(guī)律，小分子走在前頭，大分子滯后。電泳凝膠相當(dāng)于凝膠過濾中的一個(gè)帶孔膠粒。 混合樣品 帶孔膠 按分子大小分離 電泳方向 電泳 小分子 大分子 電泳后的凝膠經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色、脫色后的凝膠照片 夾在兩塊玻璃板之間的凝膠 電泳緩沖液 電泳緩沖液 加在槽中的經(jīng)SDS處理的樣品 分子量小 分子量大 電源 Thanks For Your Attention!
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