dna-酶切、回收和連接-資料下載頁
2025-08-04 17:39本頁面
【正文】 100 ml 配 LB培養(yǎng)基 液體：全班 1000 ml 150 ml 4 瓶（ Amp+），用于兩個質(zhì)粒的接種 100 ml 4瓶 (Amp)，留做感受態(tài)細胞 固體（含 %瓊脂粉）： 每組 100 ml，共 1200ml，可一起配再分裝 每組倒 5個平板（ Amp+），用于次周轉(zhuǎn)化 滅菌。 八 ． 實驗安排 周五： ? 用 Kit 提取質(zhì)粒 DNA，倒瓊脂糖凝膠板（ 1%），進行瓊脂糖凝膠電泳和濃度測定 ? 每人分別提取 pGFPuv、 pBSK質(zhì)粒 各一管，每管 60μl ? 取 12μl電泳， 15μl用 dd H2O稀釋后 在紫外分光光度計下測 OD260及 OD280，并計算濃度 ? 對質(zhì)粒酶切過夜 周六： ? 酶切樣品瓊脂糖凝膠（ 1%）電泳 ? 用 Kit對酶切后的 DNA（ pBSK 大片段和 GFP基因片段）片段進行膠回收 ? 每組用一個柱子回收 ? 電泳檢測膠回收情況，用紫外檢測回收 DNA的濃度后，存放于 20℃ 冰箱中 八．實驗安排 續(xù) 九 .DNA片段的連接 1. 根據(jù)目的片段和載體大小，以等摩爾比（載體 DNA：插入 DNA片段 =1:2~ 1:3）計算各自 DNA加樣量 連接體系： 組分 體積 目的片段（ GFP基因） 2 ?l pBSK質(zhì)粒 DNA 1 ?l 10 連接酶 buffer 1 ?l T4 DNA連接酶 ?l dd H2O X ?l → 合計 10 ?l 2. 臺式離心機離心 10秒以混合均勻， 16℃ 連接 4小時至過夜，連接產(chǎn)物存放于 4℃ 或直接轉(zhuǎn)化細菌。
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