實(shí)驗(yàn)十二dna連接與轉(zhuǎn)化-資料下載頁
2025-01-17 10:29本頁面
【正文】 ），受體菌 ? CaCl2 ? Amp 三．實(shí)驗(yàn)方法 ? 一、感受態(tài)細(xì)胞制備 ? １．將宿主菌在瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線，３７ ℃ 培養(yǎng)１６～２０小時(shí)。 ? ２．挑取單菌落轉(zhuǎn)入２０ｍｌ ＬＢ培養(yǎng)基錐瓶中，３７ ℃ 振蕩過夜。 ? ３．從中?。玻恚炀恨D(zhuǎn)入５０ｍｌ ＬＢ培養(yǎng)基中３７ ℃ 振蕩培養(yǎng)４－５小時(shí)， 測(cè)ＯＤ１００達(dá)０．４～０．５。 ? ４．培養(yǎng)物于冰上１０分鐘。 ? ５．轉(zhuǎn)入－５０ｍｌ離心管，于４０００ｒｐｍ下４ ℃ 離心１０分鐘。 ? ６．棄上清，倒置離心管１分鐘，流盡剩余殘液然后加入 10ml用冰預(yù)冷的 0. 1mol/L CaCl2，置冰上１０分鐘。 ? ７． 4,000rpm 4℃ 離心１０分鐘，棄上清。 ? ８．加入 2ml， CaCl2懸浮細(xì)胞，于４ ℃ 過夜。 二、轉(zhuǎn)化 ? １．在 Eppendorf管中加入２００ μl感受態(tài)細(xì)胞和１０ μl 40ng DNA溶液， 溫和混勻，于冰上３０分鐘。 ? ２．于４２ ℃ 水?。梗懊?。 ? ３．冰?。卜昼?。 ? ４．加入８００ μl ＬＢ 液體培養(yǎng)基３７ ℃ ４５分鐘。 ? ５．?。玻埃?μl涂布于含 Amp(50μg/ml)瓊脂糖平皿， ３７ ℃ 培養(yǎng)１２～１６小時(shí)，觀察結(jié)果。 四．結(jié)果與分析討論 ? １．計(jì)算轉(zhuǎn)化率。 ? ２．根據(jù)轉(zhuǎn)化率和陰性對(duì)照分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 ? 問題與討論： ? １．根據(jù)本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為影響轉(zhuǎn)化率的因素有哪些？ ? ２．抗性法篩選和互補(bǔ)篩選原理是什么？
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