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2025-01-12 08:01本頁面
【正文】 。 Cdc6又募集Mcm蛋白形成前復(fù)制起始復(fù)合體。 Mcm是一種 6聚體的 DNA解旋酶， Cdc6為解旋酶裝載因子。一旦前復(fù)制復(fù)合體被裝配成功，細(xì)胞便為 DNA復(fù)制的起始做好了準(zhǔn)備。當(dāng)細(xì)胞通過了R點(diǎn)或 START點(diǎn)， SCdk的活性迅速升高，使 DNA分子開始復(fù)制。 二 . 復(fù)制叉 SV40的 DNA為一 5 Kb的雙鏈環(huán)狀 DNA， 進(jìn)入細(xì)胞核后會(huì)形成核小體 。 SV40 DNA為研究哺乳動(dòng)物的復(fù)制叉提供了非常好的模型 。 與大腸桿菌的復(fù)制起始過程一樣 ， SV40 DNA的復(fù)制也發(fā)生在一個(gè)特定的位點(diǎn)上 。 病毒編碼的 T抗原是一種位點(diǎn)專一性 DNA結(jié)合蛋白 ， 它與 SV40 DNA的復(fù)制起點(diǎn)結(jié)合 ， 利用解旋酶活性局部打開 DNA雙螺旋 。 DNA雙螺旋的打開還需要 ATP和復(fù)制蛋白 A（ replication protein A, RPA） 的參與 ， RPA實(shí)際上是一種宿主細(xì)胞編碼的單鏈結(jié)合蛋白 。 在真核細(xì)胞中 ， 引發(fā)酶與 DNA聚合酶 α 形成一個(gè)復(fù)合物 ， 這個(gè)復(fù)合物在復(fù)制起點(diǎn)與單鏈模板結(jié)合 ， 并合成大約 10個(gè)核苷酸長的 RNA引物 。 接著 ， RNA引物要被 DNA聚合酶 α 延伸一小段距離 。 因?yàn)?DNA Polα/ 引物酶的延伸能力相對(duì)較低 ， 很快就被高延伸性的 DNA聚合酶 δ 或聚合酶 ε 取代 。 聚會(huì)酶 δ 或聚合酶 ε 取代DNA Polα/ 引物酶的過程稱作聚合酶切換 （ polymerase switching） 。 發(fā)生聚合酶切換時(shí) ， 細(xì)胞復(fù)制 C（ replication factor C, RFC） 結(jié)合到延長的引物上 ， 催化裝配由增殖細(xì)胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen, PCNA)構(gòu)成的滑動(dòng)夾子在模板－接頭上的組裝 ， 然后 DNA聚合酶 δ （ polδ ）結(jié)合到 PCNA上并最終完成岡崎片段的合成 ， 所以 RFC是一種夾子裝載因子 （ clamploading factor） 。 當(dāng)遇到原先已形成的岡崎片段 5`末端時(shí) ， polδ/PCNA 復(fù)合物從 DNA上釋放下來 。 復(fù)制蛋白 A（ RPA） 后隨鏈模板 聚合酶 ?/引發(fā)酶 A B C D E F G PCNA 復(fù)制因子 C（ RCF） 聚合酶 ? RNA引物 RNaseH/FEN1 岡崎片段 圖 124 參與真核 DNA復(fù)制的酶及蛋白因子 (前導(dǎo)鏈未標(biāo)明 ) 引物的去除通過兩個(gè)步驟，首先由 RNase H降解大部分 RNA引物。由于 RNase H斷裂兩個(gè)核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵，因此會(huì)留下單個(gè)核糖核苷酸連接到岡崎片段上。最后一個(gè)核糖核苷酸則由側(cè)翼內(nèi)切核酸酶（ flap endonucleae 1, FEN1）除去。 FEN1也能除去由于 DNA聚合酶 δ 產(chǎn)生的某些錯(cuò)誤的堿基。 DNA連接酶將相鄰的兩個(gè) DNA片段連接起來，形成大分子 DNA鏈。 三、端粒的復(fù)制 對(duì)于線形 DNA分子來說，后隨鏈的半不連續(xù)合成并不能復(fù)制后隨鏈模板的 3’末端。為了避免線形 DNA分子的末端隨著 DNA的復(fù)制越來越短，真核生物染色體的末端（端粒）形成了特殊的序列，由數(shù)百個(gè)簡單序列串連重復(fù)而成，并且具有 3’ 突出端。并且端粒 DNA的一條鏈富含 G。 端粒 DNA的長度是由端粒酶負(fù)責(zé)維持的。端粒酶（ telomerase）是催化端粒合成的酶，由蛋白質(zhì)及 RNA組成的。端粒酶的蛋白質(zhì)組分具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性。它的RNA組分含有與端粒重復(fù) DNA互補(bǔ)的區(qū)段。端粒酶能以以自身攜帶的 RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄合成端粒 DNA。如圖所示，通過延伸與移位交替進(jìn)行，端粒酶反復(fù)將重復(fù)單位加到突出的 3’末端上，互補(bǔ)鏈則像一般的后隨鏈那樣合成，最終留下 3’突出端。
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