dna-酶切、回收和連接-全文預(yù)覽
【正文】 5 mol/L NaOH: 100 ml 配 LB培養(yǎng)基 液體：全班 1000 ml 150 ml 4 瓶（ Amp+），用于兩個質(zhì)粒的接種 100 ml 4瓶 (Amp)，留做感受態(tài)細(xì)胞 固體（含 %瓊脂粉）： 每組 100 ml，共 1200ml，可一起配再分裝 每組倒 5個平板（ Amp+），用于次周轉(zhuǎn)化 滅菌。 pGFPuv和 pBSK的酶切體系： 酶切體系 質(zhì)粒載體（ pGFPuv和 pBSK） 10 RE buffer (E) 6 ?l 100 BSA ?l DNA 6 ?g EcoR I ?l Hind III ?l ddH2O X ?l → 合計 60 ?l 充分混勻后，用離心機(jī)短時（ 10秒）離心，于 37℃ 保溫 34小時或過夜， 65℃ 保溫 10分鐘使限制性內(nèi)切酶失活。 ⑦ 置 65℃ 水浴中 10分鐘 ， 對限制性內(nèi)切酶進(jìn)行滅活 ， 不同的酶滅活條件可能不同 ， 請參照說明書進(jìn)行 。 ③ 產(chǎn)生一個新的磷酸二酯鍵 ， 把缺口封起來 。它能識別雙鏈 DNA分子中特定的靶序列 （ 4～8bp),并在該序列內(nèi)切斷 DNA， 形成特有的粘末端或平端 。 DNA片段膠回收的方法 二 .實(shí)驗(yàn)原理 類專一識別雙鏈 DNA中特定堿基序列的核酸水解酶 ， 它們的功能類似于高等動物的免疫系統(tǒng) ， 用于抗擊外來 DNA的侵襲 。 使用方法 。 分子生物學(xué)中經(jīng)常使用的是 II型限制性內(nèi)切酶 。 ② 酶 AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有 5’磷酸基和 3’羥基切口的 DNA分子上 ， 使 DNA腺苷化 。 C for 20 min
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