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dna-蛋白質(zhì)的相互作用-資料下載頁

2025-05-10 12:50本頁面
  

【正文】 洗滌除去非特異結(jié)合的染色質(zhì)后, 用 1%SDS+NaHCO3洗脫免疫沉淀復(fù)合體。 DNA的純化 在免疫沉淀復(fù)合體中加入不含 Dnase的 Rnase, proteinase K。 65℃ 保溫 6h使交聯(lián)逆轉(zhuǎn)。 經(jīng)酚氯仿抽提 乙醇沉淀純化 DNA。 純化的 DNA極少,可用色譜定量。 DNA的分析和蛋白質(zhì)在 DNA 上結(jié)合位點(diǎn)的鑒定 染色質(zhì)免疫沉淀的 DNA的分析方法有許多種。 如果目的蛋白的靶序列是已知的或者懷疑某個序列 是目的蛋白的靶序列,可以采用狹縫雜交和 PCR分析 。 如果目的蛋白的靶序列未知或者高通量的研究目的蛋 白在基因組上的分布情況 ,找出反式作用因子的結(jié)合位 點(diǎn) ,可以采用 Southern雜交、 ChIP克隆和 DNA芯片方法。 DNA靶序列特異結(jié)合的進(jìn)一步驗證 染色質(zhì)免疫沉淀分析得到的結(jié)果有很大一部分是假陽性,需要采用其他方法驗證結(jié)果的真實性。 用 PCR方法進(jìn)行獨(dú)立的 ChIP分析、電泳遷移率變動分析、酵母單雜交系統(tǒng)及熒光素酶報告系統(tǒng)最終確定目的蛋白與靶 DNA序列的特異性結(jié)合。 近年來發(fā)展起來的基因芯片( chip)染色質(zhì)免疫沉淀 ChIP技術(shù) 相結(jié)合 (chipChIP)的方法 要一個 PCR步驟來擴(kuò)增染色質(zhì)免疫沉淀富集的 DNA。 特異性染色質(zhì)免疫沉淀的 DNA和對照 DNA的 PCR產(chǎn)物 分別用 Cy5和 Cy3熒光光標(biāo)記, 用于與含有整個基因組的 DNA芯片進(jìn)行雜交 。 通過比較兩種熒光信號的強(qiáng)度篩選出目的蛋白可能的結(jié)合序列 在基因組的水平上繪制出目的蛋白的分布圖譜 。 chipChIP法大大促進(jìn)了在基因組水平上高通量 對 DNA和蛋白質(zhì)的相互作用的研究 。 前景與展望: 進(jìn)一步研究 DNA~蛋白質(zhì)的相互作用需要 生物學(xué)、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理學(xué)、計算機(jī)學(xué)及電子學(xué)等多學(xué)科的協(xié)作 。 隨著各種新技術(shù)在這個研究領(lǐng)域的應(yīng)用, 人類一定能在不遠(yuǎn)的將來揭開蛋白質(zhì)與核酸相互作用的規(guī)律。 謝謝!
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