dna-蛋白質(zhì)的相互作用-wenkub
2023-05-21 12:50:22 本頁(yè)面
【正文】 段結(jié)合的蛋白質(zhì)分子 (比如特異的轉(zhuǎn)錄因子等 )，而且還可以用來(lái)研究發(fā)生此種結(jié)合作用之精確的 DNA序列的特異性 超量的非標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng) DNA (petitor DNA ） 材料及試劑： 2X結(jié)合緩沖液： 20 mM Tris pH 、 100 mM NaCl、 2 mM EDTA、 10% 甘油、 poly(dIdC) (5 mg/ml in TE)、 BSA (10 mg/ml)、 P32標(biāo)記探針 緩沖液 C： 20 mM HEPES pH 、 25% glycerol、 420 mM NaCl、 mM MgCl mM 二硫蘇糖醇、 mM 苯甲基磺酰氟化物、 mM EDTA 4%天然的聚丙烯酰胺凝膠 (50 ml)： 5 ml 40% 丙烯酰胺 (30:1)、 ml 5X 四溴乙烷， ml H ml 10% APS（過(guò)硫酸銨）、 50 ml 四甲基乙二胺、 四溴 烷電泳緩沖夜。 ?凝膠阻滯試驗(yàn) ? DNaseI足跡試驗(yàn) ?甲基化干擾試驗(yàn) ?體內(nèi)足跡試驗(yàn) ?酵母單雜交技術(shù) ?染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù) ?噬菌體展示技術(shù) ?核酸適體技術(shù) ?生物信息學(xué)方法 ?蛋白質(zhì)芯片技術(shù)及納米技術(shù) 一、凝膠阻滯試驗(yàn) （ DNA遷移率變動(dòng)試驗(yàn) DNA mobility shift assay） 1 原理： 在凝膠電泳中，由于電場(chǎng)的作用，裸露的 DNA朝正電 極移動(dòng)的距離與其分子量的對(duì)數(shù)成反比。而基因表達(dá)調(diào)控是 功能基因組學(xué)的一個(gè)重要研究領(lǐng)域。而要深入研究基因表 達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制必須要研究 DNA與蛋白質(zhì)的相互作用。 如果此時(shí) DNA分子與某種蛋白質(zhì)結(jié)合， 由于分子量增大，它在凝膠中的遷移作用便會(huì)受到阻滯 在特定電壓和時(shí)間內(nèi)朝正電極移動(dòng)的距離也就相應(yīng)縮短了。 填充染料： % 溴酚藍(lán)、 %二甲本藍(lán)、 50% 甘油 操作步驟： ：探針 DNA (1 ng/ml) 、 dH20 ml、 2x 結(jié)合緩沖液 ml、 BSA (10 mg/ml) ml 、 poly(dI
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