dna-蛋白質(zhì)的相互作用(已修改)
2025-05-26 12:50 本頁面
【正文】 DNA蛋白質(zhì)相互作用的研究方法 張利博 引言 DNA區(qū)段與特殊蛋白質(zhì) 結(jié)合因子之間的相互作用： DNA的復(fù)制和重組； mRNA的轉(zhuǎn)錄和修飾； 病毒的感染與增殖等 ， 功能基因組學(xué)的研究顯得尤為重要。而基因表達調(diào)控是 功能基因組學(xué)的一個重要研究領(lǐng)域。而要深入研究基因表 達調(diào)控的分子機制必須要研究 DNA與蛋白質(zhì)的相互作用。 DNA技術(shù)發(fā)展以來，已相繼分離到大量的具有重要生 物學(xué)意義的基因。在這種情況下科學(xué)工作者開始把自己的研 究興趣逐漸轉(zhuǎn)向 DNA結(jié)合蛋白這一課題上。 ?凝膠阻滯試驗 ? DNaseI足跡試驗 ?甲基化干擾試驗 ?體內(nèi)足跡試驗 ?酵母單雜交技術(shù) ?染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù) ?噬菌體展示技術(shù) ?核酸適體技術(shù) ?生物信息學(xué)方法 ?蛋白質(zhì)芯片技術(shù)及納米技術(shù) 一、凝膠阻滯試驗 （ DNA遷移率變動試驗 DNA mobility shift assay） 1 原理： 在凝膠電泳中，由于電場的作用，裸露的 DNA朝正電 極移動的距離與其分子量的對數(shù)成反比。 如果此時 DNA分子與某種蛋白質(zhì)結(jié)合， 由于分子量增大，它在凝膠中的遷移作用便會受到阻滯 在特定電壓和時間內(nèi)朝正電極移動的距離也就相應(yīng)縮短了。 2 主要步驟及內(nèi)容： 制備探針 DNA （ P32放射性同位素標(biāo)記 DNA） 同細(xì)胞蛋白質(zhì)提取物一道溫育，形成 DNA蛋白質(zhì)復(fù)合物。 將它加樣到非變性的聚丙烯酰胺凝膠中，進行電泳分離。 應(yīng)用放射自顯影技術(shù)顯現(xiàn)具放射性標(biāo)記的 DNA條帶位置 不存在與 DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)時 存在與 DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)時 凝膠阻滯試驗不僅可以用來鑒定在特殊類型細(xì)胞的提取物中，是否存在著能夠同某一特定 DNA片段結(jié)合的蛋白質(zhì)分子 (比如特異的轉(zhuǎn)錄因子等 )，而且還可以用來研究發(fā)生此種結(jié)合作用之精確的 DNA序列的特異性 超量的非標(biāo)記的競爭 DNA (petitor DNA ） 材料及
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