質(zhì)粒的提取與純化ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 18:24本頁面
【正文】 L SolutionII，混勻（注意動作輕），冰箱 3 ℃ 放置5min。 ? 2. 將菌液倒入 ml Eppendorf管中， 10,000 rpm離心 1min，去掉上清液，重復(fù)兩次。 7. 氯仿，乙醇 ， 70%乙醇 。 ? 5. 氨芐青霉素（ Amp） 用無菌水配制成 100 mg/ml 溶液，置 20℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩l (pH ) 10 mmol/L EDTA (pH ) 高壓滅菌后， 4℃ 保存?zhèn)溆谩? ? LB固體培養(yǎng)基（ 1L） 在上述 LB液體培養(yǎng)基（ 1L）中加入瓊脂粉 15g。 ? 含重組質(zhì)粒的大腸桿菌 DH 5α。 ? 用異丙醇或乙醇沉淀后洗滌，可得到較純的質(zhì)粒DNA。 結(jié)構(gòu)的三大要素： ? 多克隆位點(diǎn) ? 選擇標(biāo)記（耐藥性， LacZ） ? 獨(dú)立的復(fù)制單位 種類： ? 質(zhì)粒 ? 噬菌體 ? 酵母人工染色體（ YAC） ? 反轉(zhuǎn)錄病毒載體 ? 表達(dá)載體等 pBC SK map T載體 ? 在堿性條件（ pH ）下，線性染色體 DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性，質(zhì)粒 DNA的氫鍵雖然斷裂但兩條互補(bǔ)鏈彼此纏繞，緊密結(jié)合在一起。堿裂解法提取質(zhì)粒是實(shí)驗(yàn)室常用的方法。實(shí)驗(yàn)一 質(zhì)粒的提取 (堿法 ) 1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 2. 實(shí)驗(yàn)原理
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