質(zhì)粒的提取與純化ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-18 18:24本頁(yè)面
【正文】 入 500μL 70%乙醇洗滌 2次（ 12,000 rpm離心 3分鐘）。 ? 11. 每管中加入 25μL無菌水 1μL RNase， 37℃ 溶解質(zhì)粒 DNA。 ? 2. 于 10， 000rpm離心 30 秒，并棄去上清液。但勿過量，以免影響提取質(zhì)粒的質(zhì)量。 ? 重懸后應(yīng)該沒有細(xì)菌團(tuán)塊。 ? 不要?jiǎng)×艺駝?dòng)，以防止基因組 DNA 被剪切。 ? 5. 加 350μl Neutralization Buffer，立即輕柔顛倒離心管4～ 6 次。 ? 6. 于 13,000rpm離心 10 分鐘。 ? 7. 將步驟 6 離心后得到的上清液轉(zhuǎn)移到 Spin column 內(nèi)。 ? 8. 向 Spin column 內(nèi)加 650μl Wash Buffer，于 12，000g 離心 30～ 60 秒，并棄去接液管內(nèi)液體。 ? 10. 再次于 12， 000rpm 離心 1 分鐘，然后將 Spin column 轉(zhuǎn)移到無菌的 離心管中。 ? 11. 向 Spin column 內(nèi)加 20μl Elution Buffer、去離子水或 TE 溶液，并于室溫靜置 1 分鐘。 ? 12. 于 12， 000rpm離心 1 分鐘， 離心管內(nèi)溶液中含有質(zhì)粒 DNA。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論 ? 堿法提取質(zhì)粒是實(shí)驗(yàn)室最常用的質(zhì)粒提取方法之一，提取量較大，便于操作。
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