1質(zhì)粒dna的提取、酶切與電泳-閱讀頁
2024-08-23 07:13本頁面
【正文】 ③去除溶液中某些鹽離子與雜質(zhì)。 缺點(diǎn)： 需要量大，一般要求低溫操作。一般不需低溫長時間放置。所以，最后用 70％乙醇漂洗數(shù)次。應(yīng)用 6000相對分子質(zhì)量 的 PEG進(jìn)行DNA沉淀時，使用濃度與 DNA片段的大小成反比。要除去 DNA沉淀中 PEG。 原理是： 精胺與 DNA結(jié)合后，使 DNA在溶液中結(jié)構(gòu)凝縮而發(fā)生沉淀，并可使單核苷酸和蛋白質(zhì)雜質(zhì)與 DNA分開，達(dá)到純化 DNA的目的。低溫長時間沉淀，易導(dǎo)致鹽與 DNA共沉淀，影響以后的實驗。 Home (四）核酸的濃度測定 1 紫外分光光度法測定 DNA和 RNA的含量 前提： 核酸樣品要較純，無顯著蛋白質(zhì)、酚、瓊脂糖及其他核酸污染。 結(jié)論： 在波長 260nm紫外光下， 1 OD值的吸光度相當(dāng)于雙鏈 DNA濃度為 50μg/ml ；單鏈 DNA為 37 μg/ml ； RNA為 40 ug/ml。 b．分光光度計先用一定量的水 校正零點(diǎn) 。 d．計算濃度。 e．分析純度。 1) OD260/OD280大于 ，表明有 RNA污染。 注： 可能 出現(xiàn)既含蛋白質(zhì)又含 RNA的 DNA溶液比值為。 1）若 RNA樣品 OD260/OD280比值太小，說明有蛋白質(zhì)或酚的污染； 2）比值大于 ，可能被異硫氰酸胍等污染； 3） OD260/OD230比值小于 鹽存在。 原理： DNA、 RNA本身并不產(chǎn)生熒光，但在熒光染料溴乙錠 (EB)嵌入堿基平面之間后， DNA樣品在紫外光激發(fā)下，可發(fā)出紅色熒光，熒光強(qiáng)度與核酸含量成正比。 注意： 此法的比較主要基于目測，是估計水平。 2 對 RNA 保存： ① RNA樣品溶于 mol/L NaAc ()或雙蒸滅菌水中， 70 ℃ 保存 。 ③ 在 RNA溶液中，加 1滴 mol/L VRC(氧釩核糖核苷復(fù)合物 )凍貯于 70℃, 可
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