食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定方法-資料下載頁(yè)
2025-04-08 07:11本頁(yè)面
【正文】 光光度計(jì) （2）離心機(jī) 4 操作方法 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：，置于50ml燒瓶中，攪拌30分鐘使其充分溶解，用四層紗布過(guò)濾于玻璃離心管中，以每秒鐘3000~5000轉(zhuǎn)的速度離心10分鐘，，，，每個(gè)容量瓶，8mol/l脲的氫氧化鈉溶液充分搖2分鐘（如果離心再次離心），取透明液于比色皿中，在280nm下測(cè)定其吸光度。（做參比值） 以事先用K氏定氮法測(cè)定的樣品中蛋白質(zhì)的含量微橫坐標(biāo)上面的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 （2）樣品測(cè)定 →于50ml燒杯中→→攪拌10分鐘→四層紗布過(guò)濾到離心管中→用8mol/L脲的NaOH溶液定容，搖勻后于280nm下測(cè)吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出pro的含量。 計(jì)算： 蛋白質(zhì)= C/W 100 C從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的pro含量（mg） W測(cè)定樣品溶液相當(dāng)于樣品量（mg） 說(shuō)明： ，牛乳和可溶性pro樣品，測(cè)定糕點(diǎn)時(shí)，應(yīng)把表皮顏色去掉。 ，操作溫度應(yīng)控制在20~30℃。 四 雙縮脲法皮尼克法 1 原理： 雙縮脲在堿性條件中，能與CuSO4結(jié)合成紅紫色的絡(luò)合物。pro分子中含有肽鏈與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，也呈此反應(yīng)。本法直接用于測(cè)定像小麥粉等固體試樣的pro含量。但作為銅的穩(wěn)定劑，酒石酸鉀鈉比甘油好些。小麥粉中的pro能直接地一邊抽出一邊進(jìn)行定量。 2 試劑 ⑴甘油作為穩(wěn)定劑：取10ml10N KOH溶液，激烈攪拌，同時(shí)加入4%CuSO450ml。 ⑵酒石酸鈉作穩(wěn)定劑，吸10ml10N KOH溶液和20ml25%酒石酸鉀鈉溶液加到930ml水中，激烈攪拌，同時(shí)加入4%CuSO4液40ml。 配制以上兩種溶液、試劑，必須澄清，無(wú)氫氧化銅生成，否則重配。 3 方法：樣品測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 →使用試劑（1） →使用試劑（2） 假如用試劑（2） （1）準(zhǔn)確稱樣→→于80ml離心管→加1mlClC4→混合→加50ml酒石酸鉀鈉穩(wěn)定劑→蓋上蓋子離心10min（4000轉(zhuǎn)/分）→放置1小時(shí)→吸混合液15ml→于20ml離心管中→離心到完全透明→取上清夜5ml于→10ml容量瓶→加水定容→于550nm處測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出pro含量。 （2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 按樣品測(cè)定方法，根據(jù)樣品中pro含量， →分別加水定容，按照樣品測(cè)定其吸光度。 事先用K氏定氮法測(cè)定樣品中pro含量為橫坐標(biāo)，以上述吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4 計(jì)算：蛋白質(zhì)%=C/W100 C從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得得pro含量（mg） W測(cè)定樣液時(shí)相當(dāng)于樣品重量（mg） 歡迎您的光臨，！希望您提出您寶貴的意見(jiàn)，你的意見(jiàn)是我進(jìn)步的動(dòng)力。贈(zèng)語(yǔ)； 如果我們做與不做都會(huì)有人笑，如果做不好與做得好還會(huì)有人笑，那么我們索性就做得更好，來(lái)給人笑吧！ 現(xiàn)在你不玩命的學(xué)，以后命玩你。我不知道年少輕狂，我只知道勝者為王。不要做金錢、權(quán)利的奴隸；應(yīng)學(xué)會(huì)做“金錢、權(quán)利”的主人。什么時(shí)候離光明最近？那就是你覺(jué)得黑暗太黑的時(shí)候。最值得欣賞的風(fēng)景，是自己奮斗的足跡。壓力不是有人比你努力，而是那些比你牛幾倍的人依然比你努力。學(xué)習(xí)
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