蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定-資料下載頁
2025-08-15 23:34本頁面
【正文】 二甲基氨基萘磺酰氯法 ,丹磺酰氨基酸具有強(qiáng)烈的黃色熒光 ,靈敏性是 DNFB法的 100倍 . ? 基本原理：偶聯(lián) 環(huán)化 轉(zhuǎn)化 ?異硫氰酸苯酯能與 N末端氨基偶聯(lián)生成苯氨基硫甲酰衍生物 （ PTC肽） 異硫氰酸苯酯法（ PITC法） ? 在酸性溶液中， PTC肽經(jīng)環(huán)化裂解生成 PTC氨基酸和 N末端少一個(gè)氨基酸的剩余多肽，前者可用于 N末端氨基酸鑒定，但是該產(chǎn)物不穩(wěn)定，很快進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成 3苯基 2乙內(nèi)酰硫脲 氨基酸（ PTH氨基酸）。 ? 生成的 PTH氨基酸非常穩(wěn)定，它在 268nm處有強(qiáng)吸收峰。剩余多肽鏈的 N末端仍是自由的，可以進(jìn)一步與異硫氰酸苯酯反應(yīng)進(jìn)行第二步降解。這樣就可以從 N末端開始逐次降解下去，進(jìn)行順序測(cè)定。該方法也稱 Edman順序降解，它是制造氨基酸順序分析儀的理論基礎(chǔ)。 一般說來 ， C末端測(cè)定較 N末端分析的誤差大 。 可采用的方法有： 1． 羧肽酶法 ：羧肽酶能特異地水解 C末端氨基酸形成的肽鏈 ， 而用于測(cè)定C末端氨基酸 。 羧肽酶分 A、 B、 C、 Y4種 ， 羧肽酶 A使用最多 ， 但對(duì) C末端的 Pro、 Arg、 Lys及 Hyp不起作用 。 羧肽酶 B， 只釋放 C末端的 Lys和 Arg，可以和羧肽酶 A互補(bǔ)使用 。 羧肽酶 C的作用范圍寬 。 但對(duì) C末端的 Hyp或連續(xù)幾個(gè)甘氨酸 （ GlyGlyGly） 無作用 。 羧肽酶 Y也具很寬的作用范圍 。 2． 硼氫化鋰法 （ LiBH4法 ， 也稱 “ 還原法 ” ） ：硼氫化鋰可以與 C末端氨基反應(yīng)生成相應(yīng)的 α氨基醇 ， 水解后抽提氨基醇 ， 可用層析法分離 、 鑒定 。 3． 肼解法 （ hydrazinolysis） ： 測(cè)定 C末端氨基酸一種較為重要的方法 。 多肽與無水肼發(fā)生反應(yīng)時(shí) ， 肼可斷裂所有的肽鍵形成肼的衍生物 ， 唯有 C末端氨基酸以游離形式存在 ， 故可通過層析鑒定 。 C末端的測(cè)定 亞基拆離、肽鏈降解和肽段的分離 亞基 切成小段 蛋白分子
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