乳酸菌的鑒定與乳酸菌的抑菌性畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2024-07-22 20:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 粉50g,%,蒸餾水250ml.(90℃，開蓋滅菌10min)B液：酵母膏5g,瓊脂10g,蒸餾水250ml。(PH , 121℃滅菌20min) A、B液滅菌后在無菌狀態(tài)下混勻后倒平板。MRS 液體培養(yǎng)基：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、乙酸鈉5g、K2HPO4H2O 、MgSO47H2O 、MnSO44H2O 、吐溫80 、蒸餾水1000mL。(PH ～ , 121℃ , 滅菌20min)。PY培養(yǎng)基（100mL）：，（鹽溶液成分:無水CaCl2 ，MgSO4 ，K2HPO4 ，KH2PO4 ，NaHCO3 ，NaCl ，將CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸餾水中，再加500mL蒸餾水，一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類，繼續(xù)攪拌直到全部溶解，加蒸餾水定容至1000mL，混合后貯備于4℃)。PYG培養(yǎng)基：。SS培養(yǎng)基：牛肉粉5g、月示胨5g、乳糖10g、枸櫞酸鐵1g、瓊脂17g、蒸餾水1000mL。 指示菌種單增李斯特菌（Listeria monocytogens）、阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）、大腸桿菌（Escherichia coli）：均購于廣東微生物菌種保藏中心。 試劑脫脂奶粉：光明乳業(yè)股份有限公司；%溴甲酚綠酒精溶液：自配；瓊脂：生化試劑,福建泉州市泉港化工廠；酵母膏：生化試劑,原上海酵母廠；蛋白胨：生化試劑,上?；瘜W試劑采購供應站中心化工廠；牛肉膏：生化試劑,北京奧博星生物技術有限責任公司；葡萄糖：分析純試劑,國藥集團化學試劑有限公司；乙酸鈉：分析純試劑,成都科龍化工試劑廠；檸檬酸三銨：分析純試劑,上海試四赫維化工有限公司；磷酸氫二鉀：分析純試劑,上海光鏵科技有限公司；MgSO47H2O：分析純試劑,上海美興化工有限公司；MnSO44H2O：分析純試劑,上海美興化工有限公司；吐溫80（聚山梨酯80）：分析純試劑,上海申宇醫(yī)藥化工有限公司。 儀器和設備LDZX50FBS立式壓力蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠；SHP150恒溫培養(yǎng)箱：上海山連實驗設備有限公司；電子顯微鏡：上海欣茂儀器有限公司；CA13901垂直層流潔凈工作臺：上海上凈凈化設備有限公司；電熱鼓風干燥箱：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；FL1可調(diào)式封閉式電爐：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；GL21M高速冷凍離心機：上海市離心機械研究所有限公司；其他器材：燒杯、玻璃棒、吸量管、洗耳球、膠頭滴管、涂布棒、試管等。 樣品的處理奶酪的處理：以無菌操作取奶酪1g，放入含有9mL滅菌加熱至含40℃左右的生理鹽水的滅菌廣口瓶內(nèi)，待奶酪溶解制成1:10的均勻稀釋液，并用無菌生理鹽水逐級稀釋至1010105。 乳酸菌的分離純化采用BCG牛乳培養(yǎng)基對稀釋樣品中的微生物通過平板傾注法進行分離純化。以無菌操作取奶酪稀釋液1010105 ，加入15mL BCG牛乳培養(yǎng)基，帶培養(yǎng)基凝固后放入恒溫培養(yǎng)箱中，37℃恒溫培養(yǎng)24h。觀察結(jié)果稍扁平的黃色菌落，周圍培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，初步定為乳酸菌[3]。 革蘭氏染色洗片→載玻片上滴一滴蒸餾水→玻璃棒蘸取一滴菌液在玻片上→晾干→結(jié)晶紫初染1min→水洗→晾干→碘液媒染30s→水洗→晾干→95%酒精脫色20s→水洗→晾干→番紅復染→水洗→晾干→鏡檢。 菌種的擴大培養(yǎng)配制MRS液體培養(yǎng)基，分裝到試管中(每管約15mL),將選出的菌種接種到試管中在37℃條件下擴大培養(yǎng)24h，在接種到小三角瓶中擴大培養(yǎng)24h。 乳酸菌的抑菌實驗管碟法a) 將擴大培養(yǎng)的菌液進行離心(條件: 10000r/min,10min)；b) 在培養(yǎng)皿中加入約15ml的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；c) 待第一層培養(yǎng)基冷卻后，加入混有致病菌的培養(yǎng)基約15ml；d) 待培養(yǎng)基冷卻后，加入牛津杯進行固定；e) 在牛津杯中加入菌液及無菌水進行對照(等邊三角形)；f) 將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)(條件:37℃,24h)。 抑菌物質(zhì)的確定初篩菌株的發(fā)酵上清液，用1mol/L ，參照抑菌試驗所述方法作抑菌活性對比。過氧化氫酶溶解在50mmol /L 的磷酸緩沖液( pH= )中配成母液,加入到發(fā)酵液中使過氧化氫酶的終濃度為5mg/mL,在3
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