酶學(xué)與酶工程第五章酶分子修飾學(xué)生-資料下載頁(yè)
2025-05-28 02:04本頁(yè)面
【正文】 點(diǎn)；? 含有四環(huán)素抗性（ Tetr）和氨芐敏感性（ Amps）? 利用輔助噬菌體超感染 , 制備含目標(biāo)基因的單鏈DNA作為突變模板 DNA。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? ③ 基于去除特定限制性酶切位點(diǎn)的突變College of Life Sciences? ④ 利用聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)產(chǎn)生定點(diǎn)突變? 利用 PCR方法在基因的 5‘ 或 3’ 末端區(qū)產(chǎn)生突變。? 該方法是利用 PCR反應(yīng)中，寡核苷酸引物序列被攙入到所產(chǎn)生的 DNA分子的末端。所以，只要引物 3‘ 端核苷酸序列能足夠好地與模板序列相匹配，引發(fā) PCR反應(yīng)，我們就可以改變引物上 5‘ 端的序列。? 重疊延伸和基因突變（中心區(qū)產(chǎn)生突變）? 利用 PCR技術(shù)在目標(biāo)基因的中心區(qū)段引入位點(diǎn)特異性突變和產(chǎn)生重組 DNA分子。? 當(dāng)將重組延伸方法用以將不同的基因進(jìn)行剪接和組合在一起時(shí)，稱為 gene SOEing，即通過(guò)重疊延伸進(jìn)行剪接（ splicing by overlap extension） 。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? 利用上述原理，可以通過(guò)重疊延伸 PCR技術(shù)對(duì)基因的中心區(qū)段進(jìn)行取代、插入和缺失突變。College of Life SciencesCollege of Life SciencesCollege of Life SciencesCollege of Life Sciences 基因工程技術(shù)不但可使基因產(chǎn)生特異性位點(diǎn)突變，也可以產(chǎn)生區(qū)域性的突變。? 常用的方法如盒式突變法 (cassette mutagenesis)，又稱片段取代法 (DNA fragment replacement)。? 這一方法的要點(diǎn)是利用目標(biāo)基因中所具有的適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶位點(diǎn)，用具有任何長(zhǎng)度、任何序列 (或任何混合序列 )的 DNA片段來(lái)置換或取代目標(biāo)基因上的一段 DNA序列。College of Life Sciences? 一、在酶學(xué)研究方面的應(yīng)用? 1. 酶活性中心的研究? 2. 酶的空間結(jié)構(gòu)研究? 3. 酶的作用機(jī)制研究。College of Life Sciences? 二、在醫(yī)藥方面的應(yīng)用? 在醫(yī)藥方面的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下兩個(gè)方面? 1. 降低或消除酶抗原性 通過(guò)酶分子修飾可以顯著降低甚至消除酶的抗原性? College of Life Sciences? 三、在工業(yè)方面的應(yīng)用? ? ? 3. 改變酶的動(dòng)力學(xué)特性College of Life Sciences? 三、在抗體酶研究開(kāi)發(fā)方面的應(yīng)用? 具有酶的催化活性的抗體，稱之為抗體酶（ abzyme）又稱催化性抗體（ catalytic antibody）。? 特點(diǎn) : 抗體酶具有典型的酶反應(yīng)特性：與配體 (底物 )結(jié)合的專一性，包括立體專一性，抗體酶催化反應(yīng)的專一性可以達(dá)到甚至超過(guò)天然酶的專一性? 具有高效催化性? 抗體酶還具有與天然酶相近的米氏方程動(dòng)力學(xué)及 pH依賴性等? 抗體酶可催化多種化學(xué)反
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