酶學與酶工程第五章酶分子修飾學生-資料下載頁
2025-05-28 02:04本頁面
【正文】 點；? 含有四環(huán)素抗性（ Tetr）和氨芐敏感性（ Amps）? 利用輔助噬菌體超感染 , 制備含目標基因的單鏈DNA作為突變模板 DNA。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? ③ 基于去除特定限制性酶切位點的突變College of Life Sciences? ④ 利用聚合酶鏈反應 (PCR)產生定點突變? 利用 PCR方法在基因的 5‘ 或 3’ 末端區(qū)產生突變。? 該方法是利用 PCR反應中，寡核苷酸引物序列被攙入到所產生的 DNA分子的末端。所以，只要引物 3‘ 端核苷酸序列能足夠好地與模板序列相匹配，引發(fā) PCR反應，我們就可以改變引物上 5‘ 端的序列。? 重疊延伸和基因突變（中心區(qū)產生突變）? 利用 PCR技術在目標基因的中心區(qū)段引入位點特異性突變和產生重組 DNA分子。? 當將重組延伸方法用以將不同的基因進行剪接和組合在一起時，稱為 gene SOEing，即通過重疊延伸進行剪接（ splicing by overlap extension） 。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? 利用上述原理，可以通過重疊延伸 PCR技術對基因的中心區(qū)段進行取代、插入和缺失突變。College of Life SciencesCollege of Life SciencesCollege of Life SciencesCollege of Life Sciences 基因工程技術不但可使基因產生特異性位點突變，也可以產生區(qū)域性的突變。? 常用的方法如盒式突變法 (cassette mutagenesis)，又稱片段取代法 (DNA fragment replacement)。? 這一方法的要點是利用目標基因中所具有的適當的限制性內切酶位點，用具有任何長度、任何序列 (或任何混合序列 )的 DNA片段來置換或取代目標基因上的一段 DNA序列。College of Life Sciences? 一、在酶學研究方面的應用? 1. 酶活性中心的研究? 2. 酶的空間結構研究? 3. 酶的作用機制研究。College of Life Sciences? 二、在醫(yī)藥方面的應用? 在醫(yī)藥方面的應用主要體現(xiàn)在以下兩個方面? 1. 降低或消除酶抗原性 通過酶分子修飾可以顯著降低甚至消除酶的抗原性? College of Life Sciences? 三、在工業(yè)方面的應用? ? ? 3. 改變酶的動力學特性College of Life Sciences? 三、在抗體酶研究開發(fā)方面的應用? 具有酶的催化活性的抗體，稱之為抗體酶（ abzyme）又稱催化性抗體（ catalytic antibody）。? 特點 : 抗體酶具有典型的酶反應特性：與配體 (底物 )結合的專一性，包括立體專一性，抗體酶催化反應的專一性可以達到甚至超過天然酶的專一性? 具有高效催化性? 抗體酶還具有與天然酶相近的米氏方程動力學及 pH依賴性等? 抗體酶可催化多種化學反
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