酶學(xué)與酶工程第五章酶分子修飾學(xué)生-資料下載頁
2025-05-28 02:04本頁面
【正文】 點；? 含有四環(huán)素抗性（ Tetr）和氨芐敏感性（ Amps）? 利用輔助噬菌體超感染 , 制備含目標(biāo)基因的單鏈DNA作為突變模板 DNA。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? ③ 基于去除特定限制性酶切位點的突變College of Life Sciences? ④ 利用聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)產(chǎn)生定點突變? 利用 PCR方法在基因的 5‘ 或 3’ 末端區(qū)產(chǎn)生突變。? 該方法是利用 PCR反應(yīng)中，寡核苷酸引物序列被攙入到所產(chǎn)生的 DNA分子的末端。所以，只要引物 3‘ 端核苷酸序列能足夠好地與模板序列相匹配，引發(fā) PCR反應(yīng)，我們就可以改變引物上 5‘ 端的序列。? 重疊延伸和基因突變（中心區(qū)產(chǎn)生突變）? 利用 PCR技術(shù)在目標(biāo)基因的中心區(qū)段引入位點特異性突變和產(chǎn)生重組 DNA分子。? 當(dāng)將重組延伸方法用以將不同的基因進(jìn)行剪接和組合在一起時，稱為 gene SOEing，即通過重疊延伸進(jìn)行剪接（ splicing by overlap extension） 。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? 利用上述原理，可以通過重疊延伸 PCR技術(shù)對基因的中心區(qū)段進(jìn)行取代、插入和缺失突變。College of Life SciencesCollege of Life SciencesCollege of Life SciencesCollege of Life Sciences 基因工程技術(shù)不但可使基因產(chǎn)生特異性位點突變，也可以產(chǎn)生區(qū)域性的突變。? 常用的方法如盒式突變法 (cassette mutagenesis)，又稱片段取代法 (DNA fragment replacement)。? 這一方法的要點是利用目標(biāo)基因中所具有的適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶位點，用具有任何長度、任何序列 (或任何混合序列 )的 DNA片段來置換或取代目標(biāo)基因上的一段 DNA序列。College of Life Sciences? 一、在酶學(xué)研究方面的應(yīng)用? 1. 酶活性中心的研究? 2. 酶的空間結(jié)構(gòu)研究? 3. 酶的作用機(jī)制研究。College of Life Sciences? 二、在醫(yī)藥方面的應(yīng)用? 在醫(yī)藥方面的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下兩個方面? 1. 降低或消除酶抗原性 通過酶分子修飾可以顯著降低甚至消除酶的抗原性? College of Life Sciences? 三、在工業(yè)方面的應(yīng)用? ? ? 3. 改變酶的動力學(xué)特性College of Life Sciences? 三、在抗體酶研究開發(fā)方面的應(yīng)用? 具有酶的催化活性的抗體，稱之為抗體酶（ abzyme）又稱催化性抗體（ catalytic antibody）。? 特點 : 抗體酶具有典型的酶反應(yīng)特性：與配體 (底物 )結(jié)合的專一性，包括立體專一性，抗體酶催化反應(yīng)的專一性可以達(dá)到甚至超過天然酶的專一性? 具有高效催化性? 抗體酶還具有與天然酶相近的米氏方程動力學(xué)及 pH依賴性等? 抗體酶可催化多種化學(xué)反
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