酶學(xué)與酶工程第五章酶分子修飾學(xué)生(已修改)
2025-06-09 02:04 本頁(yè)面
【正文】 College of Life Sciences? 通過(guò)各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的技術(shù)過(guò)程稱為酶分子修飾。? 包括物理修飾、化學(xué)修飾，分子改造等College of Life Sciences? 一、酶修飾的作用? 1. 穩(wěn)定酶的天然構(gòu)象與增強(qiáng)耐熱性? 2．保護(hù)酶活性部位與抗抑制劑? 3． 維持酶功能結(jié)構(gòu)的完整性與抗蛋白水解酶? 4． 降低酶的抗原性及穩(wěn)定酶的微環(huán)境? 5． 改變酶學(xué)性質(zhì)College of Life Sciences? 二、酶修飾的方法? 化學(xué)修飾? 酶改造的分子生物途徑? 酶分子的物理修飾College of Life Sciences? 一、酶分子化學(xué)修飾的一般問(wèn)題? 酶分子的化學(xué)修飾對(duì)酶結(jié)構(gòu)與功能、酶的催化機(jī)制等酶學(xué)研究方面有著重要作用，而在酶工程中所運(yùn)用的修飾方法與基礎(chǔ)研究的要求有所不同。? 1．選擇酶分子修飾劑? 理想的修飾劑是選擇性高、在溫和反應(yīng)條件下能進(jìn)行修飾反應(yīng)、被修飾的功能基在溫和條件下能再生。College of Life Sciences? ① 能選擇性地與一個(gè)氨基酸殘基反應(yīng)；? ② 反應(yīng)在保證酶蛋白不變性的條件下進(jìn)行；? ③ 被標(biāo)記的殘基在酶中穩(wěn)定，容易通過(guò)降解分離出來(lái)并鑒定；? ④ 反應(yīng)程度能用簡(jiǎn)單的技術(shù)測(cè)定。College of Life Sciences? 選擇修飾劑時(shí)要考慮幾點(diǎn)：? ① 修飾劑的相對(duì)分子質(zhì)量、修飾劑鏈的長(zhǎng)度對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性；? ② 修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的數(shù)目及位置；? ③ 修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的活化方法與條件。College of Life Sciences? 2．選擇反應(yīng)條件? ① 反應(yīng)體系中酶與修飾劑的分子比例；? ② 反應(yīng)體系的溶劑性質(zhì)、鹽濃度和 pH條件；? ③ 反應(yīng)溫度及時(shí)間。? 3．修飾劑的活化? 活化基團(tuán)才能在一定條件下與酶分子的某側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)College of Life Sciences? 4．修飾? 將帶有活化基團(tuán)的大分子修飾劑與經(jīng)過(guò)分離純化的酶液，以一定的比例混合，在一定的溫度、 pH值等條件下反應(yīng)一段時(shí)間，使修飾劑的活化基團(tuán)與酶分子的某側(cè)鏈基團(tuán)以共價(jià)鍵結(jié)合，對(duì)酶分子進(jìn)行修飾。? 5．分離? 需要通過(guò)不同的方法進(jìn)行分離，將具有不同修飾度的酶分子分開(kāi)，從中獲得具有較好修飾效果的修飾酶。College of Life Sciences? 二、金屬離子置換修飾? 把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變的修飾方法成為金屬離子置換修飾。? 金屬離子置換修飾的方法：酶的純化、去除原有的金屬離子、加入置換離子? 金屬離子置換修飾的作用：十一次課College of Life Sciences? 三、酶分子側(cè)鏈基團(tuán)修飾? 功能基團(tuán)主要有氨基、羧基、巰基．咪唑基、吲哚基、酚羥基、羥基、胍基、甲硫基? 酶?jìng)?cè)鏈基團(tuán)的修飾方法很多，主要有氨基修飾、羧基修飾、巰基修飾、酚基修飾、胍基修飾、咪唑基修飾、吲哚基修飾及分子內(nèi)交聯(lián)修飾等College of Life Sciences 各種氨基酸側(cè)鏈的修飾劑氨基酸
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