酶學(xué)與酶工程第五章酶分子修飾學(xué)生(編輯修改稿)
2025-06-24 02:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 6 min 1 右旋糖酐 SOD 7 h 70 Ficoll(低分子量 )–SOD 14 h 140 Ficoll(高分子量 )–SOD 24 h 240 聚乙二醇 SOD 35 h 350College of Life Sciences? 五、肽鏈有限水解修飾? 利用酶分子主鏈的切斷和連接，使酶分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的特性和功能的方法。? 酶蛋白主鏈修飾主要是靠酶切 /酶原激活法。a、胃蛋白酶原的激活 College of Life Sciences? 有限水解意味著水解酶量和時(shí)間相對少? 同時(shí)由于水解部位氨基酸 ” 埋 ” 在蛋白位置差異 ,氨基酸周圍肽段引起的氨基酸 pK值和電性變化 ,使同樣氨基酸部位水解程度也可能不同 酶蛋白的肽鏈被水解后，可能出現(xiàn)以下三種情況中的一種：1 引起酶活性中心的破壞，酶失去催化功能。2 仍維持活性中心的完整構(gòu)象，保持酶活力。3 有利于活性中心與底物結(jié)合并形成準(zhǔn)確的催化部位，酶活力提高。 College of Life Sciences? 六、氨基酸置換修飾? 將酶分子肽鏈上的某一個(gè)氨基酸換成另一個(gè)氨基酸的修飾方法，稱為氨基酸置換修飾。? 修飾方法：化學(xué)修飾法、定點(diǎn)突變技術(shù)College of Life Sciences? 通過各種物理方法使酶分子的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的方法稱為酶分子的物理修飾。? 通過酶分子的物理修飾，可以了解在不同物理?xiàng)l件下特別是在高溫、高壓、高鹽、低溫、真空、失重、極端 pH、有毒等極端環(huán)境下，由于酶分子空間構(gòu)象的改變而引起酶的特性和功能的變化情況。College of Life Sciences? 酶分子物理修飾的特點(diǎn)在于不改變酶的組成單位及其基團(tuán)，酶分子中的共價(jià)鍵不發(fā)生改變。只是在物理因素的作用下，次級鍵發(fā)生某些變化和重排，使酶分子的空間構(gòu)象發(fā)生某些改變。? 酶分子空間構(gòu)象的改變還可以在某些變性劑的作用下，首先使酶分子原有的空間構(gòu)象破壞，然后在不同的物理?xiàng)l件下，使酶分子重新構(gòu)建空間構(gòu)象。College of Life Sciences? 例如：? 首先用鹽酸胍使胰蛋白酶的原有空間構(gòu)象被破壞，通過透析除去變性劑后，在不同的溫度條件下，使酶重新構(gòu)建新的空間構(gòu)象。? 結(jié)果表明：在 20 ℃ 的條件下重新構(gòu)建的胰蛋白酶與天然酶的穩(wěn)定性基本相同，而在 50 ℃ 的條件下重新構(gòu)建的酶的穩(wěn)定性比天然酶提高 5倍。College of Life SciencesCollege of Life Sciences? 一、工具酶? 限制性內(nèi)切酶? II型酶的識(shí)別序列通常為 46bP，具有回文結(jié)構(gòu)，大多數(shù)酶是錯(cuò)位切割雙鏈 DNA，產(chǎn)生 5’ 或 3’ 末端突出的粘性末端 (sticky end)。? GAATTC? DNA連接酶? DNA聚合酶? 末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶College of Life Sciencesn 二、載體n 外源 DNA本身沒有自主復(fù)制能力，導(dǎo)入宿主
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