研究生入學考試]酶學及酶工程課3章3節(jié)(編輯修改稿)
2025-01-31 14:45 本頁面
【文章內容簡介】 園度與波長的關系稱園二色譜 ， 各種二級結構有不同的園二色譜和特征峰位 ，因而園二色譜可用于測定二級結構 。 CD譜對二級結構變化很靈敏 ， 常用于監(jiān)測構象變化 。 蛋白質中各種二級結構具有各自的特征園二色譜 二級結構計算 單值法計算 α螺旋（殘基百分比）： fα=([θ]2084000)/(330004000) 全值計算二級結構： fα ＋ fβ ＋ fR ＝ 1 [θ] λ = fα[θ] λ, α + fβ[θ] λ, β + fR[θ] λ,R 假設一系列 λ處的 fα， fβ， fR值，計算得到[θ] λ對 λ曲線，和測定結果比較，取擬合最好的數(shù)值。 蛋白質的構象變化造成二級結構改變時，園二色譜發(fā)生變化。從而可以測定去折疊（變性）和重折疊（復性）的狀態(tài)和變化 4. 紅外光譜 (RTIR) 蛋白質在紅外區(qū)表現(xiàn) 8個特征基團頻率。 酰胺基團紅外光譜 紅外光譜用于分析蛋白質二級結構已進入定量階段。 最常用于二級結構分析的是酰胺 I帶，位于1600－ 1700cm1范圍。 碳氧和氮氫間的氫鍵決定酰胺 I帶振動頻率，反映特定二級結構。 1986年 Byler和 Susi用二階導數(shù)和去卷積法分析，給出了各構象的特征酰胺 I帶位置，確定了各子峰的歸屬。 水溶液中 酰胺 I帶特征頻率 指認 重水中 酰胺 I帶 特征頻率指認 水在酰胺 I帶有一定紅外吸收，因此也用重水中的指認提供進一步依據(jù)。 去卷積譜和二階導數(shù)譜 紅外光譜 :去卷積譜曲線擬合 多種二級結構振動吸收峰重疊形成寬峰，難以區(qū)分。利用去卷積技術于傅立葉變換紅外光譜，可將其分解為多個子峰，定量分析各構象成分。 紅外光譜 :二級結構指認例 對肌酸激酶 Holo酶和 Apo酶的 FTIR酰胺 I帶二級結構的指認結果。 第三章 酶的結構與功能 第三節(jié) 去折疊與重折疊研究 1. 蛋白質 折疊機制研究 現(xiàn)代分子生物學基于以下的認識：一級結構決定高級結構 ， 結構確定功能 。 即有了新生肽鏈就有相應的功能蛋白 。 新生肽鏈確定功能蛋白嗎 ？ 應該是肯定的 。否
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