研究生入學(xué)考試]酶學(xué)及酶工程課3章3節(jié)(文件)
【正文】 + RSH ? TNBSH + RSSTNB 產(chǎn)物 TNB在 412nm處有很強(qiáng)光吸收 ， 而 DTNB沒(méi)有 。 巰基暴露實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)該酶三級(jí)結(jié)構(gòu)打開(kāi)和其它方法測(cè)定的第一階段整體構(gòu)象變化同步發(fā)生。按胍濃度由低到高， FAS的構(gòu)象變化依次為：可逆抑制，全反應(yīng)的不可逆失活，組成酶的不可逆失活，整體構(gòu)象變化 I，整體構(gòu)象變化 Ⅱ 。測(cè)定表明抑制為非競(jìng)爭(zhēng)性，可能是對(duì)活性部位構(gòu)象的微擾造成的。全反應(yīng)和單獨(dú)還原反應(yīng)胍失活的終態(tài)活性相似表明該失活的原因?yàn)榛钚圆课坏牟豢赡鏄?gòu)象變化造成 。此階段各項(xiàng)測(cè)定的變化值均已到位，二級(jí)結(jié)構(gòu)已破壞，蛋白分子完全去折疊。 FAS的分子折疊可能有以下過(guò)程： 1）二級(jí)結(jié)構(gòu)形成； 2）各組成酶三級(jí)結(jié)構(gòu)形成； 3）調(diào)整各活性部位之間的相對(duì)位置，形成復(fù)合酶整體結(jié)構(gòu)； 4）活性部位結(jié)構(gòu)微調(diào)形成有活性的酶。 The END 。選擇其中一個(gè)方法敘述一個(gè)具體的研究實(shí)例。 討論（續(xù)） 胍失活的 FAS不能直接稀釋復(fù)活，反映了FAS折疊和去折疊一樣也是分階段進(jìn)行的，不同階段進(jìn)行不同部分或不同程度的折疊，也需要不同條件。此階段巰基已基本暴露，紫外差光譜變化已基本到位，但 CD譜變化還較小，表現(xiàn)此階段三級(jí)結(jié)構(gòu)已打開(kāi)，二級(jí)結(jié)構(gòu)還基本保持。該失活速度大大高于組成酶的失活，因此其失活不是由于活性部位不可逆構(gòu)象變化造成的，很可能是由于復(fù)合酶整體的不可逆的構(gòu)象變化造成各活性部位相對(duì)位置變化造成的。 1. 可逆抑制 。 在很低胍濃度下該酶的全反應(yīng)活性和兩個(gè)單獨(dú)還原中心活性同步被可逆抑制，且先于不可逆抑制的發(fā)生。 需測(cè)定快速作用過(guò)程時(shí)還可應(yīng)用 stoppedflow等方法 。 巰基暴露測(cè)定 肽鏈折疊和展開(kāi)狀態(tài)不同時(shí) ， 暴露在外的可作用巰基數(shù)目不同 。 協(xié)助復(fù)性方法包括控制溫度、 pH、速度，使用分子伴侶，滲壓劑 osmolytes等。 目前認(rèn)為，去折疊和重折疊遵循互逆的同一途徑。 產(chǎn)生了折疊的多態(tài)階段理論 。 折疊理論 早期的二態(tài)理論：蛋白質(zhì)存在未折疊和全折疊兩種狀態(tài) ， 折疊態(tài)的能量最低 ， 熱力學(xué)規(guī)律使新生肽鏈只能迅速折疊成有活性的功能蛋白 。 但是新生肽鏈如何確定的功能蛋白
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1